[發明專利]一種牛病毒性腹瀉病毒樣顆粒的制備的制備方法

在審

• 申請號: 201910261702.8
• 申請日: 2019-04-02
• 公開（公告）號: CN110004178A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 倪偉;胡圣偉;陳創夫;李村院;李曉悅;張翔宇
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C12N15/66;C07K14/01
• 代理公司: 烏魯木齊恒智專利商標代理事務所(普通合伙) 65102
• 代理人: 李靖

本發明公開了一種牛病毒性腹瀉病毒樣顆粒的制備方法。通過將I型BVDV的結構蛋白C、E^rns、E1、E2編碼基因克隆至pFastBac^TMDual構建pFBD?BVDV重組桿狀病毒穿梭載體，轉染昆蟲細胞，感染昆蟲細胞表達BVDV的結構蛋白C、E^rns、E1、E2，制備由結構蛋白C、E^rns、E1、E2自組裝形成的BVDV病毒樣顆粒(VLP)。

技術領域

本發明涉及一種牛病毒性腹瀉病毒樣顆粒、一種牛病毒性腹瀉病毒基因重組桿狀病毒的制備。

背景技術

牛病毒性腹瀉(粘膜病)是由牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus簡寫 BVDV屬于黃病毒科瘟病毒屬)引起的牛、羊和豬的一種接觸性傳染病。牛、羊以消化道黏膜糜爛、壞死，胃腸炎和腹瀉為特征，各種年齡的牛都易感染、以幼齡牛易感性最高；豬則表現為懷孕母豬的不孕、產仔數下降和流產，以及仔豬的生長遲緩和先天性震顫等。一旦感染，可造成持續感染，持續感染牛處于免疫耐受狀態時，臨床上不表現任何癥狀，但仍然帶毒、排毒，可嚴重損壞機體的免疫機能，引起牛的生產性能下降，還可以誘發其他病原體的感染而導致繼發感染或混合感染等，給養牛業造成了巨大的經濟損失，是危害養牛業的主要疫病之一(Yilmaz H，Altan E，Ridpath J，et al.Genetic diversity and frequencyof bovine viral diarrhea virus(BVDV)detected in cattle in Turkey[J].Comparative immunology，microbiology and infectious diseases，2012，35(5):411-416.)。

BVDV屬于黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)，為正鏈、單股RNA病毒，全長約12.5kb，基因組只含有一個開放閱讀框，編碼11種蛋白，其中P14(C)、gP48(E^rns)、gP25(El)、gP53(E2)4個蛋白為病毒結構蛋白，其余為非結構蛋白(Neill J D.Molecularbiology of bovine viral diarrhea virus[J].Biologicals，2013，41(1):2-7.)。E^rns、El、E2三個結構蛋白位于病毒表面，因此組成病毒囊膜結構的三種囊膜蛋白(Uryvaevaev LV， Ionova K S，Dedova A V，et al.Analysis of the cell tissue culturecontamination with the bovine viral diarrhea virus and mycoplasmas[J].Voprosyvirusologii，2012，57(5):15-21.)。其中，E2位于病毒粒子的外表面，含有病毒重要的抗原決定簇，免疫原性最強，是病毒主要的免疫保護性抗原，能誘導機體產生細胞免疫與體液免疫，同時產生保護性的中和抗體 (Harpin S，Hurley D J，Mbikay M，et al.Vaccinationof cattle with a DNA plasmid encoding the bovine viral diarrhoea virus majorglycoprotein E2[J].Journal of general Virology， 1999，80(12):3137-3144.)，介導免疫中和反應，參與宿主細胞識別，吸附過程，因此作為診斷抗原具有良好的前景。Bolin SR等早在1996年就利用昆蟲細胞表達的BVDV E2 蛋白免疫牛，結果表明，E2蛋白能夠有效的保護免疫動物免受同源毒株的攻擊(Bolin S R， Ridpath J F.Glycoprotein E2ofbovine viral diarrhea virus expressed in insect cells provides calveslimited protection from systemic infection and disease[J].Archives ofvirology，1996， 141(8):1463-1477.)。Harpin S等用含有E2基因的重組質粒免疫牛，結果表明，免疫動物能夠產生特異性免疫應答(Harpin S，Hurley D J，Mbikay M，etal.Vaccination of cattle with a DNA plasmid encoding the bovine viraldiarrhoea virus major glycoprotein E2[J].Journal of general Virology，1999，80(12):3137-3144.)。Ferrer等利用桿狀病毒蛋白表達體系 (Rachiplusia nuperos)獲得E2重組蛋白，通過免疫小鼠，該蛋白可誘導中和抗體的產生 (Ferrer F，Zoth S C，CalamanteG，et al.Induction of virus-neutralizing antibodies by immunization withRachiplusia nu per os infected with a recombinant baculovirus expressing theE2glycoprotein of bovine viral diarrhea virus[J].Journal of virologicalmethods，2007， 146(1-2):424-427.)。