[發明專利]CKAP4抗原表位肽、抗原、單克隆抗體及其應用和CKAP4檢測試紙條

有效

• 申請號: 201910256742.3
• 申請日: 2019-04-01
• 公開（公告）號: CN110054663B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 王云龍;張璐;李玉林;程蕾;王繼創;鄧黎黎
• 申請（專利權）人: 河南省生物工程技術研究中心
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K16/28;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/52
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41134
• 代理人: 張鵬

本發明涉及免疫組學和蛋白質組學技術領域，具體涉及CKAP4抗原表位肽、抗原、單克隆抗體及其應用和CKAP4檢測試紙條。CKAP4抗原表位肽為多肽A或多肽B，多肽A的氨基酸序列為RSHQDFSRQREEL，多肽B的氨基酸序列為DSHGPKEDGG。分別以多肽A和多肽B為來源制備了相應的抗原和單克隆抗體，均可特異性地與CKAP4結合，所得到的單克隆抗體也可用于CKAP4的檢測，并制作了CKAP4檢測試紙條，可實現血清中CKAP4的快速檢測。

技術領域

本發明涉及免疫組學和蛋白質組學技術領域，具體涉及CKAP4抗原表位肽、抗原、單克隆抗體及其應用和CKAP4檢測試紙條。

背景技術

肺癌發病率在男性惡性腫瘤中已居首位，在女性發病率也迅速增高，肺癌成為危害生命健康的一種主要疾病。多數患者確診時病情已發展至中晚期，錯過疾病的治療的最佳時期，治療難度進一步加大。因此，尋找有效的腫瘤標志物用于癌變的機理研究、疾病的早期診斷及高危人群的篩查成為肺癌研究的當務之急。

目前臨床上常用的早期診斷肺癌的方法主要有傳統的X線胸片、痰脫落細胞及纖維支氣管鏡等檢查方法，其應用于肺癌的篩查(尤其在高危人群中)并沒有降低被篩選人群肺癌的死亡率，同時由于檢測敏感性差、過程痛苦、患者耐受性差、不能早期動態監測等而受到限制。

肺癌標志物是在腫瘤發生、發展過程中由腫瘤細胞表達、分布在組織、血液和體液中的大分子物質，具有組織特異性，其分布的類型及濃度變化與發病個體的腫瘤起源和生長密切相關，因其具有可以從分子生物學方向對肺癌進行分子診斷、分型分期等優點，近年來被臨床上廣泛應用于肺癌早期診斷、臨床分型和預后評判。因此研究和發現肺癌的特異性標志物，建立經濟、更適合早期診斷的檢測方法，對肺癌的防治工作無疑將起到極大的作用。

CKAP4，又稱P63、細胞骨架相關膜蛋白4(CKAP4)，分子量63KD，是一種II型跨膜蛋白，連接于內質網與微管之間。最新研究表明，在肺癌的Ⅰ-Ⅳ期，血清中血清癌胚胎抗原，細胞角蛋白19片段和SCC抗原的敏感性分別為30％-52％、17％-82％和24％-39％。研究指出，血清中CKAP4的敏感性在訓練組為81％，在驗證組為69％，均高于目前臨床應用的血清診斷標志物的敏感性。

目前，CKAP4快速診斷試劑盒的研制處于起步階段，其中獲得抗CKAP4的特異性多肽或抗體、并采用合適的方法將其應用于檢測是制備CKAP4快速診斷試劑盒的關鍵技術。抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子抗原性的基礎。因此，CKAP4抗原表位的發現是其單克隆抗體和快速診斷試劑盒的研發的重要基礎，目前尚未見有研究CKAP4抗原表位相關的文獻公開。

雖然，目前抗原表位可以利用生物信息學軟件來預測，然而，越來越多的研究表明，軟件預測抗原表位的錯誤概率較高，且軟件對抗原表位的預測只針對目的抗原蛋白的全長，真正應用的過程中往往存在著特異性的問題，需要實驗證實。

發明內容

本發明對CKAP4的抗原表位進行研究，發現了2個抗原表位肽；

此外，本發明還在上述抗原表位肽的基礎上制備了CKAP4抗原；

本發明還制備得到了可特異性識別上述抗原表位多肽與載體偶聯制備得到的抗原的單克隆抗體；

本發明的另一目的在于，明確了上述單克隆抗體可用于制備檢測CKAP4試劑盒/試紙條；

最后，本發明還在上述單克隆抗體的基礎上建立了可快速檢測CKAP4的檢測試紙條。

本發明的CKAP4抗原表位肽采用如下技術方案：一種CKAP4抗原表位肽，所述抗原表位肽為多肽A或多肽B，所述多肽A的氨基酸序列為RSHQDFSRQREEL，所述多肽B的氨基酸序列為DSHGPKEDGG。