[發明專利]一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法

在審

• 申請號: 201910254908.8
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN110178725A
• 公開（公告）日: 2019-08-30
• 發明（設計）人: 鄭玉忠;陳蕓;張振霞;林敏;丁黛靈;杜穎青;董婷霞;詹華強
• 申請（專利權）人: 韓山師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 許羽冬

1.一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)培養無菌苗：將天山雪蓮種子做滅菌處理，將無菌種子用25℃的無菌水浸泡24h，接種在濕潤的、無菌的、帶濾紙的培養皿中萌發；

(2)誘導愈傷組織：將無菌苗的葉、根和莖轉接至添加有植物激素的MS培養基上，在培養室誘導愈傷組織生長；

(3)高壓滅菌：將裝有25～50mL無菌懸浮培養液的錐形瓶，在120℃溫度下高壓滅菌16～18min；

(4)懸浮培養愈傷組織：將雪蓮愈傷組織剪碎成顆粒，置于無菌懸浮培養液的錐形瓶中，然后放在搖床中，在轉速為80～110r/min、溫度為23～27℃、光照為8～14h/d的條件下培養15～25天，然后更換新的15～100mL懸浮培養液，繼續培養10～30天；

(5)干燥：培養結束后，過濾分離得到愈傷組織，用蒸餾水洗2遍以上，置于30～55℃烘箱中烘干至恒重，即得干燥愈傷組織。

2.根據權利要求1所述的一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法，其特征在于：天山雪蓮種子滅菌處理的方法為：使用70％乙醇處理30s，然后用0.1％升汞處理10min，最后用無菌水清洗4次。

3.根據權利要求1所述的一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法，其特征在于：培養無菌苗時，培養室的溫度為15～20℃，室內相對濕度為50％～70％，光照強度為1 000～1500lx。

4.根據權利要求1所述的一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法，其特征在于：誘導愈傷組織時，培養室的溫度為18～22℃，相對濕度為50％～70％，光照為12h/d，光照強度為1000～1 500lx。

5.根據權利要求1所述的一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法，其特征在于：誘導愈傷組織時，MS培養基上添加量的植物激素為：0.1～1.0mg/mL的6-BA與1.0～3.0mg/mL的NAA。

6.根據權利要求1所述的一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法，其特征在于：高壓滅菌時，愈傷組織顆粒的直徑為0.3～3.0mm，分散濃度為5～50個顆粒/mL。

7.根據權利要求1所述的一種天山雪蓮愈傷組織的懸浮培養方法，其特征在于：懸浮培養愈傷組織時，懸浮培養液為添加有0.1～1.0mg/mL的6-BA與1.0～3.0mg/mL的MS液體培養基，懸浮培養液pH＝5.5～7.0。