[發明專利]一種枯草芽孢桿菌BSLN-08及其培養方法和應用

在審

• 申請號: 201910253921.1
• 申請日: 2019-03-30
• 公開（公告）號: CN109868245A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 嚴明;章志林;陳圣;魏森
• 申請（專利權）人: 南京朗奈生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/02;C12R1/125
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 龔擁軍

本發明公開了一種枯草芽孢桿菌BSLN?08及其培養方法和應用，涉及微生物技術領域，具有高轉化D?葡萄糖生成D?阿洛酮糖的能力，能夠以葡萄糖為原料，顯著降低D?阿洛酮糖的生產成本?？莶菅挎邨U菌BSLN?08取枯草芽孢桿菌BSLN?08接種于固體培養基中，制得活化菌株，在種子培養基中增殖培養后制得種子液，種子液在發酵培養基中擴大即得菌體發酵液。本發明首次獲得與D?葡萄糖水性溶液接觸高產D?阿洛酮糖的枯草芽孢桿菌BSLN?08，與傳統制備D?阿洛酮糖的方法相比，此過程更加經濟環保。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，尤其涉及一種枯草芽孢桿菌BSLN-08及其培養方法和應用。

背景技術

枯草芽孢桿菌，屬芽孢桿菌屬的一種。單個細胞0.7～0 .8×2～3微米，著色均勻。芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色至淡黃色，需氧菌，革蘭氏陽性菌。

隨著人們對健康飲食的日益重視，研發健康安全的低熱量功能性甜味劑成為食品行業研究的重點。D-阿洛酮糖是近年發現的一種新型功能性稀少糖，其甜度相當于蔗糖的70% ,但能量只有蔗糖的0.3%，可以用作低卡路里減肥食品的甜味劑。它還示出重要的生理機能，例如活性氧種類清除活性和神經保護作用，它也可以用作肝脂肪生成酶和腸α-糖苷酶的抑制劑，用于減少體內脂肪累積。此外，D-阿洛酮糖還能夠改善食品風味、外觀等，延長食品的保存期限。2011 年美國FDA批準D-阿洛酮糖為GRAS物質。因此，D-阿洛酮糖這種健康安全的低熱量功能性甜味劑已獲得越來越多學者的關注，成為最具市場競爭力的新型甜味劑之一。

由于D-阿洛酮糖是一種較為稀有的天然單糖，從自然界中分離提取產量低，成本高，難以滿足人們作為低熱量健康甜味劑的需要，也不適宜工業化大生產的要求，因此為了應用于食品工業，需要有高效的D-阿洛酮糖生產方法。目前生物法制備D-阿洛酮糖最為有效的方法是使用將果糖轉變為D-阿洛酮糖的酶。然而催化活性高的酶資源仍然很少，且果糖生產工藝復雜，技術要求高，導致成本較高不利于D-阿洛酮糖的普及推廣。

葡萄糖是果糖的同分異構體，在自然界中分布最廣,也是最重要的單糖。游離狀態的葡萄糖存在于植物果實中, 動物中也有存在。葡萄糖是有機體能量的主要來源, 是許多糖類化合物的組成部分，在糖果制造業和醫藥領域有著廣泛應用。結晶葡萄糖生產工藝簡單, 過程容易控制, 成本低廉。

發明內容

本發明提供一種枯草芽孢桿菌BSLN-08及其培養方法和應用，枯草芽孢桿菌BSLN-08具有高轉化D-葡萄糖生成D-阿洛酮糖的能力，以葡萄糖為原料，顯著降低D-阿洛酮糖的生產成本。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種枯草芽孢桿菌BSLN-08，于2019年1月14日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.17169，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號 中國科學院微生物研究所。

枯草芽孢桿菌BSLN-08的原始菌株分離于廣東省韶關市翁源縣翁源廣業食品科技有限公司附近甘蔗地的土壤，并經過誘變后獲得。該菌株在LB培養基上形成的菌落呈微黃色，半透明，菌落表面粗糙，邊緣不規整，呈波浪狀。經顯微鏡觀察，該菌株長約1.0～1.5微米，寬約0.6～0.9微米，無莢膜，周生鞭毛，芽孢位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。該菌株發酵培養后經簡單的離心、洗滌即可得到粗酶制劑，與高濃度的D-葡萄糖（700g/L）水性溶液接觸高產D-阿洛酮糖，可以顯著降低D-阿洛酮糖的生產成本。

一種枯草芽孢桿菌BSLN-08的培養方法，步驟包括：

S1、取枯草芽孢桿菌BSLN-08接種于固體培養基中，在37℃的條件下，活化培養12h，制得活化菌株；

S2、取S2制得的活化菌株，接種于種子培養基中，在37℃的條件下，增殖培養12h，制得種子液；