[發明專利]一種用于分枝桿菌的脂質萃取方法

有效

• 申請號: 201910249716.8
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109821271B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 溫建業;石耀林;陳勝鋒
• 申請（專利權）人: 佛山科學技術學院
• 主分類號: B01D11/02
• 分類號: B01D11/02;C11B1/10
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 王國標

本發明提供了一種用于分枝桿菌的脂質萃取方法，通過優化后的幾種混合試劑對分枝桿菌進行高效率的脂質萃取。本發明的用于分枝桿菌的脂質萃取方法，操作簡單，成本低廉，同時石油醚相比傳統試劑更為安全，來源方便，對脂質的溶解度也更大，有效地提高了分枝桿菌脂質提取的萃取效率和萃取純度。

技術領域

本發明涉及一種脂質萃取方法，具體涉及一種用于分枝桿菌的脂質萃取方法。

背景技術

結核病是由結核桿菌感染引起的慢性傳染病。結核菌可能侵入人體全身各種器官，但主要侵犯肺臟，稱為肺結核病。結核病是青年人容易發生的一種慢性和緩發的傳染病。潛伏期4～8周。其中80％發生在肺部，其他部位(頸淋巴、腦膜、腹膜、腸、皮膚、骨骼)也可繼發感染。人與人之間呼吸道傳播是本病傳染的主要方式，傳染源是接觸排菌的肺結核患者。隨著環境污染和艾滋病的傳播，結核病發病率越發強烈。

目前，結核病疫苗是預防結核病的主要手段之一，但結核病傳統疫苗依然存在時有免疫效果不佳的情況，針對結核病傳統疫苗出現免疫效果不佳的情況，學者一直在研究新型的抗結核疫苗，其中就包括研發脂類抗結核疫苗，而制備該疫苗所需要的是萃取分枝桿菌細胞壁的脂類作為材料。目前，國內外對分枝桿菌脂質的萃取方法研究甚少，且傳統的方法萃取純度低，萃取量少，嚴重降低了實驗研究效率。

發明內容

為了解決現有技術問題，本發明提供了一種用于分枝桿菌的脂質萃取方法，具體包括以下技術方案：

一種用于分枝桿菌的脂質萃取方法，包括以下步驟：

步驟一：

準備分枝桿菌烘干進行稱重，將分支桿菌加入至離心管A中，向離心管A中每1g干重分枝桿菌菌體加入3mL甲醇和0.3％NaCl的混合試劑，混懸1h～2h后離心，離心轉速3000rpm，離心15min收取分枝桿菌至離心管B；

步驟二：

根據步驟一中烘干后的分支桿菌的稱重重量，每1g干重分枝桿菌菌體加入3mL氯仿、甲醇和水的混合試劑到離心管B，在37℃～45℃的條件下萃取30min；

步驟三：

根據步驟一中烘干后的分支桿菌的稱重重量，每1g干重分枝桿菌菌體加入2mL正己烷、甲醇和磷酸的混合試劑至離心管B中，再加入1mL石油醚進行離心，離心轉速3500rpm，離心5min后將上層液體移去新的離心管C；

步驟四：

根據步驟一中烘干后的分支桿菌的稱重重量，接著每1g干重分枝桿菌菌體再向離心管B中加入1mL正己烷和1mL石油醚混勻1h，萃取后進行離心，離心轉速3500rpm，離心5min后再將上層液體移去步驟3中的離心管C，將兩次上層液體合并；

步驟五：

將合并后的液體進行濃縮，根據步驟一中烘干后的分支桿菌的稱重重量，濃縮液每1g干重分枝桿菌菌體以6ml的冷丙酮沉淀3次；

步驟六：

根據步驟一中烘干后的分支桿菌的稱重重量，將沉淀每1g干重分枝桿菌菌體用12mL正己烷和石油醚的混合試劑溶解；

步驟七：

將溶解液在氮氣吹干儀下干燥，析出脂質。

優選地，步驟一中，甲醇與0.3％NaCl的體積比為100:10。

優選地，步驟一中，混懸時間為1.5h。

優選地，步驟二中，氯仿、甲醇和水的體積比為65:25:4。

優選地，步驟二中，萃取溫度為40℃。

優選地，步驟三中，正己烷、甲醇和磷酸的體積比為10:4:1。