[發(fā)明專利]一種基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法

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• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109884293A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發(fā)明（設計）人: 李振興;王雅晴;林洪
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/558;G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 青島致嘉知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 單虎

1.一種基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，包括：

步驟1：采用碳二亞胺法將兔抗蝦多克隆抗體共價偶聯(lián)至量子點表面，形成量子點熒光探針；

步驟2：熒光免疫層析試紙條的構建；

步驟3：將步驟1中的量子點熒光探針與待測樣品混合后，進行層析檢測。

2.根據(jù)權利要求1所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述步驟1具體為：

11)向反應容器中加入量子點溶液10μL，加入碳二亞胺鹽酸鹽溶液和N-羥基硫代琥珀酰亞胺(sulfo-NHS)溶液，攪拌活化一段時間；

12)再向反應容器中加入兔抗原肌球蛋白多克隆抗體和PBS緩沖液，置于25℃震蕩培養(yǎng)箱中避光反應1h；

13)將牛血清白蛋白(BSA)加入到上述復合溶液中，然后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.根據(jù)權利要求2所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述步驟11)中，量子點溶液是濃度為5μM的CdSe量子點溶液；所述碳二亞胺鹽酸鹽為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)。

4.根據(jù)權利要求3所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的重量比為1～5:1；所述活化時間為5-10min。

5.根據(jù)權利要求2所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述步驟12)中，所述兔抗原肌球蛋白多克隆抗體濃度為3.5mg/mL，用量為50μL；所述PBS緩沖溶液用量為130μL；

所述步驟13)中，所述BAS的最終濃度為1％-1.5％。

6.根據(jù)權利要求1所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述步驟2中，所述熒光免疫層析試紙條由底板、樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊組成；所述樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次貼附于所述底板上，每種材料間互相重疊2-3mm；使用自動切條機將其裁切，置于塑料試紙條卡殼中，室溫干燥保存。

7.根據(jù)權利要求6所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上設置有原肌球蛋白檢測線和羊抗兔IgG抗體質(zhì)控線，二者間隔為4-5mm。

8.根據(jù)權利要求7所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述原肌球蛋白檢測線和羊抗兔IgG抗體質(zhì)控線的制備方法為：通過使用自動劃膜儀，分別將0.8mg/mL原肌球蛋白抗原和1.0mg/mL羊抗兔IgG抗體噴涂于硝酸纖維素膜上，噴涂量為1.0μL/cm，噴涂后將NC膜置于37℃烘箱中干燥。

9.根據(jù)權利要求1所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述步驟3具體為：向反應容器中添加10μL量子點熒光探針，并加入待測樣品與緩沖液，充分混合反應5min后，滴加至組裝好的試紙卡槽中進行層析。

10.根據(jù)權利要求9所述的基于量子點熒光的食品過敏原快速檢測方法，其特征在于，所述量子點熒光探針、待測樣品和緩沖溶液的重量比為：1:1:8。