[發(fā)明專利]一種抑制滴灌灌水器微生物堵塞的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910248766.4
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109997655B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李云開;宋鵬;周泓序
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01G25/02
• 分類號: A01G25/02;C12Q1/689;C12Q1/10;C12Q1/04;C12N1/20
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

1.一種抑制滴灌灌水器微生物堵塞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采用發(fā)育分子生態(tài)網(wǎng)絡(luò)分析確定導(dǎo)致滴灌灌水器堵塞的關(guān)鍵菌，然后進(jìn)行抑制滴灌灌水器堵塞的拮抗菌篩選；

(2)將篩選出的拮抗菌于含有沼液的培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，制備成拮抗菌劑；

(3)將拮抗菌劑應(yīng)用于滴灌系統(tǒng)；

所述拮抗菌篩選的方法，包括以下步驟：

1)培養(yǎng)灌水器流道內(nèi)附生生物膜，然后提取堵塞物質(zhì)生物膜微生物；

2)提取生物膜中微生物的總DNA，擴(kuò)增16S rRNA的V3-V4可變區(qū)，純化，定量檢測以及測序；

3)將生物膜微生物的測序結(jié)果用于構(gòu)建發(fā)育分子生態(tài)網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)細(xì)菌之間的相關(guān)性，篩選出影響生物膜生長的關(guān)鍵菌；同時根據(jù)滴灌作物，選擇具有生物防治功能的菌種作為備選菌，然后結(jié)合上述篩選出來的關(guān)鍵菌進(jìn)行拮抗實驗，篩選出備選菌中和關(guān)鍵菌出現(xiàn)拮抗作用的菌種作為拮抗菌；

所述發(fā)育分子生態(tài)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和分析方法為：首先對各菌種的OTU原始數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后，利用MENA網(wǎng)絡(luò)分析系統(tǒng)計算OTU節(jié)點之間的連接強度，然后進(jìn)行可視化處理，得到網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)圖，找出其中與其他OUT鏈接數(shù)高的OUT，即為影響生物膜生長的關(guān)鍵菌；

所述具有生物防治功能的菌種包括：滴灌作物生育期間導(dǎo)致作物發(fā)病的病原菌和作物根部中促進(jìn)作物生長的益生菌，所述病原菌包括細(xì)菌類、病毒類、真菌類，所述益生菌包括農(nóng)桿菌、固氮菌、固氮螺菌、伯克氏菌、假單胞菌、微球菌、根瘤菌類或弗蘭克菌；

利用滴灌灌水器抗堵塞性能綜合測試裝置進(jìn)行生物膜培養(yǎng)；

所述拮抗菌劑的制備方法包括以下步驟：將新鮮沼液進(jìn)行濃縮，然后將沼液和拮抗菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，制備拮抗菌劑；

所述濃縮的方法包括：將新鮮沼液，在真空狀態(tài)下置入反應(yīng)釜中進(jìn)行濃縮，濃縮壓力為1×10⁵ Pa，濃縮至沼液含水率為60％；

將沼液和拮抗菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)的方法包括：按照重量份數(shù)計，將拮抗菌15～20份、亞硒酸鈉0.4～0.8份、紅糖6～8份加入75～85份沼液中，在25-28℃溫度條件下均勻攪拌并且發(fā)酵4-10天，得到液體菌肥，向液體菌肥中施加微納米氣泡，得到拮抗菌劑；

將拮抗菌劑應(yīng)用于滴灌系統(tǒng)的方法包括：在灌水器平均流量下降25％時或系統(tǒng)累積運行100h后，將制作的拮抗菌劑與滴灌水源按照體積比1:500-1500比例混合，輸入滴灌系統(tǒng)；

所述將拮抗菌劑應(yīng)用于滴灌系統(tǒng)的方法還包括：進(jìn)行周期性施加，施加頻率為1次/1～2周，每次施加2～3h。