[發明專利]一種抑制變異鏈球菌和白色念珠菌雙菌生物膜的方法

有效

• 申請號: 201910248276.4
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109908185B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 陳衛;張秋香;秦蘇佳;張灝;趙建新
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A61K35/747
• 分類號: A61K35/747;A61P1/02;A61P31/02;A61P31/04;A61P31/10
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發明公開了一種抑制變異鏈球菌和白色念珠菌雙菌生物膜的方法，屬于微生物技術領域。在雙菌生物膜形成的不同階段，植物乳桿菌CCFM8724具有體外抑制變異鏈球菌和白色念珠菌雙菌生物膜的能力，在不同時間作用雙菌生物膜能顯著減少生物膜的產胞外多糖量和生物膜中致病菌數，并且能夠耐受1.6mg/mL的溶菌酶，同時在不同蔗糖濃度下成膜性都較差，均低于0.80以下，說明該植物乳桿菌不會有取代致齲菌形成致齲生物膜的可能。本發明提供的方法具有減少口腔致齲牙菌斑、防治齲齒的功效，有望為益生菌防治齲齒打開一個新的功能市場。

技術領域

本發明涉及一種抑制變異鏈球菌和白色念珠菌雙菌生物膜的方法，屬于微生物技術領域。

背景技術

齲病是發生于牙釉質及牙本質上的細菌感染性疾病，而牙菌斑生物膜的形成是齲病發生的先決條件。成熟的牙菌斑生物膜是口腔細菌嵌于不溶性多糖為主的基質內形成的一種三維立體的生態環境，富含空隙及管道系統，具有一定厚度。一旦由于宿主、飲食、微生物的生長等因素的變化而導致該生態失衡時，牙菌斑生物膜中的致齲微生物成為優勢菌群，它們快速代謝分解碳水化合物，尤其是蔗糖，產生有機酸，使pH降低到5.5以下，導致牙釉質脫礦化和牙齒硬組織結構損壞從而形成齲洞。

變異鏈球菌是公認的主要致齲菌。雖然變異鏈球菌不是口腔中最豐富的細菌，但它能快速協調致齲性生物膜的形成，并能結合其他致齲菌形成毒力更強的致齲生物膜。與口腔中浮游細菌不同的是，生物膜中的細菌通常營養受限，在這種近似休眠狀態下的細菌比浮游的代謝活性細菌更耐抗生素和抑菌劑，此外，許多治療劑在它們作用細菌之前就與生物膜中的胞外多糖結合，從而失去效用。這也是抗菌劑和抗生素在臨床上防治齲齒效果不佳的原因之一。因此，“益生菌療法”是當前技術開發的熱點。

已有研究證明，植物乳桿菌可以抑制變異鏈球菌的生長從而抑制齲病的程度(CN108486022A公開日：2018.09.04)。但臨床調查發現，齲病患者的口腔中通常可同時檢出白色念珠菌和變異鏈球菌(Hajishengallis E等人，Molecular oral microbiology,2017,32(1):24-34.)，因此研究益生菌對變異鏈球菌與真菌白色念珠球菌的雙種生物膜的抑制作用，對于防治齲齒越來越重要。

白色念珠球菌與變異鏈球菌的關聯能夠增強變異鏈球菌的致病性并強化致齲生物膜的形成。白色念珠菌粘附牙面的能力較弱，但與變異鏈球菌結合后，口腔定植能力大大增強。變異鏈球菌產生的葡萄糖基轉移酶(GTF)可與白色念珠菌細胞壁上的甘露聚糖粘附，將其募集到早期牙菌斑生物膜上(Ellepola K等人，Journal of dental research,2017,96(10):1129-1135.)。具有更大表面積的白色念珠菌可為更多的變異鏈球菌提供結合位點，增多的變異鏈球菌數量反過來又增加了白色念珠菌的數量。雙種生物膜比單種生物膜具有更高的生物量和細胞數量，且已有研究證實白色念珠菌和口腔鏈球菌的生物膜對抗生素的耐藥性高于單一物種(Shirtliff M E等人，FEMS microbiology letters,2009,299(1):1-8.)，雙菌生物膜的這些特性無疑加大了對其導致的齲病治療的難度。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種抑制變異鏈球菌和白色念珠菌雙菌生物膜的方法，所述方法是利用植物乳桿菌來抑制變異鏈球菌和白色念珠菌雙菌生物膜的形成。

在本實用新型的一種實施方式中，所述植物乳桿菌是植物乳桿菌CCFM8724。

在本實用新型的一種實施方式中，所述變異鏈球菌是變異鏈球菌ATCC 25175。

在本實用新型的一種實施方式中，是用植物乳桿菌CCFM8724發酵上清或菌泥在所述雙菌生物膜形成的不同階段進行介導。

在本實用新型的一種實施方式中，所述植物乳桿菌CCFM8724發酵上清或菌泥是將植物乳桿菌CCFM8724在MRS液體培養基中培養，離心后分別得到上清和菌泥。