[發明專利]一種從中藥石蒜中制備生物堿類化合物的選擇性富集方法

在審

• 申請號: 201910248137.1
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN111743957A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 梁鑫淼;劉艷芳;王委;金紅利;高德嵩;蔡新娜
• 申請（專利權）人: 泰州醫藥城國科化物生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: A61K36/88
• 分類號: A61K36/88
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 張寧馨

1.一種從中藥石蒜中制備生物堿類化合物的選擇性富集方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）石蒜浸膏的制備：石蒜藥材采用醇水體系提取，減壓濃縮得到石蒜浸膏；

（2）石蒜粗堿的制備：采用TEAM柱對步驟（1）得到的石蒜浸膏進行脫色除雜，富集純化，得到石蒜粗堿；

（3）石蒜粗堿的液相分析：采用分析柱對步驟（2）中得到的石蒜粗堿進行液相分析；

（4）石蒜總堿的制備：采用S柱對步驟（2）得到的石蒜粗堿進行洗脫、分離、富集，得到石蒜總堿；

（5）石蒜總堿的液相分析：采用分析柱對步驟（4）得到的石蒜總堿進行液相分析和生物堿鑒別，鎖定生物堿成分合并凍干獲得石蒜總生物堿。

2.根據權利要求1所述一種從中藥石蒜中制備生物堿類化合物的選擇性富集方法，其特征在于：步驟（1）所述石蒜浸膏的制備方法為：稱取一定量的石蒜藥材粉末，用10~30倍量，濃度為50%~90%的乙醇溶液，采用超聲回流提取或者加熱回流提取法，提取1~5次，每次提取時間為50~100分鐘，合并提取液，抽濾，在40℃~80℃的條件下減壓濃縮，得到石蒜浸膏。

3.根據權利要求1所述一種從中藥石蒜中制備生物堿類化合物的選擇性富集方法，其特征在于：石膏粗堿的制備方法為：稱取一定量的步驟（1）得到的石蒜浸膏溶解于濃度為50%~90%醇水中，調節樣品濃度為10 mg/mL~500 mg/mL，上樣，上樣量為TEAM柱填料質量的20%~50%，采用線性梯度、臺階梯度或等度洗脫方式；樣品經過一次淋洗，淋洗：淋洗液為10~100 mL濃度為 50%~90%（V/V）乙醇溶液，流速為1 mL/min~5 mL/min，淋洗液的溫度在40℃~80℃的條件下，減壓濃縮至有機溶液完全除去，既得石蒜粗堿。

4.根據權利要求3所述一種從中藥石蒜中制備生物堿類化合物的選擇性富集方法，其特征在于：TEAM柱的填料為氨基、磺酸基修飾瓊脂糖填料，TEAM柱的參數為：5~10 mL預裝柱，粒徑為100~200 μm，最高耐壓0.5 ~10 MPa。

5.根據權利要求1所述一種從中藥石蒜中制備生物堿類化合物的選擇性富集方法，其特征在于：步驟（3）分析柱選用C18ME或者C18HCE，首先C18ME，檢測波長為210~400 nm。

6.根據權利要求1所述一種從中藥石蒜中制備生物堿類化合物的選擇性富集方法，其特征在于：石蒜總堿的制備方法為：稱取一定量的步驟（2）得到的石蒜粗堿溶解于濃度為50%~90%醇水中，調節樣品濃度為10 mg/mL~100 mg/mL，上樣，上樣質量為S柱填料質量的20%~50%，采用線性梯度、臺階梯度或等度洗脫方式；樣品經過四次淋洗，淋洗一: 淋洗液為10~100 mL，濃度為 50%~90%（V/V）乙醇水溶液，流速為1 mL/min~5 mL/min；淋洗二：淋洗液為10~100 mL，濃度為 20%~80%（V/V）乙醇~氨水溶液，其中，氨水溶液體積濃度為1%~20%，流速為1 mL/min~5 mL/min；淋洗三：淋洗液為10~100 mL ，濃度為50%~90%（V/V）乙醇水溶液，流速為1 mL/min~5 mL/min；淋洗四：淋洗液為10~100 mL ，濃度為20%～80%（V/V）乙醇~鹽酸水溶液，其中鹽；酸水溶液體積濃度為1%~2%，流速為1 mL/min~5 mL/min；收集洗脫液，減壓濃縮中有機溶劑完全除去，既得到石蒜總堿，凍干溫度為~80 ℃，真空度為1~5 Pa。

7.根據權利要求6所述一種從中藥石蒜中制備生物堿類花歌舞的選擇性富集方法，其特征在于：S柱的填料為氨基、磺酸基修飾的填料，S柱的參數為5~10 mL預裝柱，粒徑為10~100 μm，最高耐壓0.5 ~10 MPa。

8.根據權利要求1所述一種從中藥石蒜中年制備生物堿類化合物的選擇性富集方法，其特征在于：步驟（5）中分析柱為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；生物鑒別方法為：碘化鉍鉀試劑、硅鎢酸試劑、雷氏銨鹽試劑同時鑒別。