[發(fā)明專利]銀杏GbBBX25基因及其表達(dá)蛋白和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910248136.7
• 申請(qǐng)日: 2019-03-28
• 公開（公告）號(hào): CN109825511B
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐立安;吳雅瓊;陳彩慧;王建文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/00
• 代理公司: 南京申云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本申請(qǐng)公開了一種銀杏GbBBX25基因及其表達(dá)蛋白和應(yīng)用，該銀杏GbBBX25基因的堿基序列如SEQ ID NO.1所示。本申請(qǐng)從銀杏中分離得到GbBBX25基因，編碼了273個(gè)氨基酸的819bp開放閱讀框(ORF)，包含兩個(gè)b?box結(jié)構(gòu)域，但沒有CCT結(jié)構(gòu)域。GbBBX25定位于細(xì)胞核，具有轉(zhuǎn)錄因子重要的核定位特征。GbBBX25轉(zhuǎn)錄本主要在葉片中表達(dá)量最高，鹽脅迫下誘導(dǎo)效果顯著。GbBBX25在山新楊中過量表達(dá)，證實(shí)了在鹽脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因楊樹的可溶性糖、總蛋白含量和過氧化物酶(POD)活性均高于非轉(zhuǎn)基因楊樹，表明GbBBX25可以通過提高抗氧化系統(tǒng)的效率來提高耐鹽性。GbBBX25在轉(zhuǎn)基因楊樹中過量表達(dá)可以提高植株的耐鹽性，提高GbBBX25基因的表達(dá)水平可用于育種中來面對(duì)非生物脅迫，具有很好的實(shí)用性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種銀杏GbBBX25基因及其表達(dá)蛋白和應(yīng)用。

背景技術(shù)

植物已進(jìn)化出了一種復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，它以高度復(fù)雜的機(jī)制應(yīng)對(duì)不穩(wěn)定的非生物和生物的條件。干旱、高鹽、低溫等非生物脅迫是影響植物生長發(fā)育的重要因素，在育種工作中，不僅需培育高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的優(yōu)良品種，而且還要培育出適應(yīng)多種逆境的高抗品種。鋅指蛋白在調(diào)控植物生長發(fā)育和應(yīng)對(duì)逆境過程中發(fā)揮著重要作用。B-box(BBX)蛋白質(zhì)是鋅指轉(zhuǎn)錄因子或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其中包含一個(gè)或兩個(gè)B-box。1995年，在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)B-box蛋白(CO)。2009年，在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了32個(gè)具有N端B-box結(jié)構(gòu)域的蛋白，統(tǒng)一命名為BBX1-32。根據(jù)B-box域的數(shù)量和序列特征以及蛋白質(zhì)是否包含CCT域，分為5個(gè)結(jié)構(gòu)組。結(jié)構(gòu)組I有6個(gè)成員(CO，也稱為BBX1到6)，每一個(gè)都包含兩個(gè)b-box域和一個(gè)CCT域。第II組有7個(gè)成員(BBX7到13)，結(jié)構(gòu)類似于I組，但在第二個(gè)b-box域有差異。結(jié)構(gòu)組III有4個(gè)成員(BBX14到17)，其特征是只有一個(gè)b-box域和一個(gè)CCT域。BBX2到17都是共同的(COL)蛋白質(zhì)。結(jié)構(gòu)組IV有8個(gè)成員(BBX18到25)，其中包含兩個(gè)b-box框域，但沒有CCT域。最后，結(jié)構(gòu)組V有7個(gè)成員(BBX26到32)，每個(gè)成員只有一個(gè)b-box域。

BBX蛋白在響應(yīng)光、晝夜節(jié)律信號(hào)和油菜素類固醇的光串?dāng)_信號(hào)中起轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用有研究表明BBX蛋白可以促進(jìn)非生物應(yīng)激反應(yīng)。據(jù)報(bào)道，AtBBX24的過量表達(dá)被認(rèn)為是提高了耐鹽性。CmBBX24在菊花中的過量表達(dá)，提高了植物對(duì)低溫和干旱的耐受水平。同時(shí)，AtBBX18通過控制一組熱休克反應(yīng)基因，參與熱耐受。盡管取得了這些進(jìn)展，BBX結(jié)構(gòu)域在DNA結(jié)合中的確切生化作用及生物學(xué)功能仍在很大程度上不清楚。

銀杏是一種生態(tài)經(jīng)濟(jì)樹種，具有食品、醫(yī)藥、木材、景觀和科研等價(jià)值-。銀杏葉中含有豐富的活性成分，特別是黃酮類和萜內(nèi)酯類化合物，能促進(jìn)血液循環(huán)，抑制血栓形成。目前，由于其藥用價(jià)值，它是世界上最受歡迎的功能性植物之一。銀杏是銀杏綱唯一存活的樹種，可追溯到1.7億年前侏羅紀(jì)時(shí)期。地質(zhì)記錄表明，銀杏形態(tài)發(fā)生了微小的變化，表明其對(duì)環(huán)境變化的適應(yīng)性強(qiáng)，對(duì)惡劣環(huán)境的耐受性強(qiáng)。

迄今為止，BBX基因已在一些物種中有報(bào)道，包括藻類、蕨類、針葉、單子葉和雙子葉植物。但尚未有關(guān)于銀杏BBX鋅指類蛋白的功能研究。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種銀杏GbBBX25基因，滿足耐鹽使用需求。本發(fā)明的另一目的是提供一種上述銀杏GbBBX25基因的表達(dá)蛋白。本發(fā)明還有一目的是提供一種上述銀杏GbBBX25基因的應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

銀杏GbBBX25基因，其堿基序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的銀杏GbBBX25基因的表達(dá)蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

含有所述的銀杏GbBBX25基因的載體或宿主菌。