[發明專利]基于3D-HCR水凝膠的汞離子快速可視化檢測方法

有效

• 申請號: 201910247622.7
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN110079584B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 許文濤;羅云波;邵向麗;朱龍佼;馮瑜祥;黃昆侖
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.一種汞離子響應型超快擴增可視化傳感器，其特征在于，包括：(1)EXPAR擴增體系，(2)酶切體系，(3)3D-HCR及顯色檢測體系；

所述檢測體系用于對待測樣品依次經由所述EXPAR擴增體系、酶切體系和3D-HCR體系進行反應后所得產物進行顯色檢測；

其中，所述EXPAR擴增體系包括模板鏈和/或雙重擴增模板鏈，以及底物鏈：

底物鏈X1：5′-CTA CAC GCG ATT CAT GAG TC TTTA-3′

模板鏈X’-Y’：5′-CTG GCT CCT GTG ATT GTG CTC TAG T TTTT GACTC ATG AAT CGCGTG TAG-3′

雙重擴增模板鏈Y’-Y’：5′-CTG GCT CCT GTG ATT GTG CTC TAG AACA GACTC CTG GCTCCT GTG ATT GTG CTC TAG-3′；

所述酶切體系包括Nt.BstNBI切刻內切酶；

所述3D-HCR及顯色檢測體系包括：兩條引物、3D-HCR緩沖液和AuNPs包被液：

引物H1：5′-GAT CGC GAT C CTG GCT CCT GTG ATT GTG CTC TAG ACA TCG CTA GAGCAC AAT CAC AGG-3′

引物H2：5′-CTA GAG CAC AAT CAC AGG AGC CAG TTTT CCT GTG ATT GTG CTC TAGCGA TGT-3′

3D-HCR緩沖液：2.5mM NaH₂PO₄·2H₂O,8mM Na₂HPO₄·12H₂O,150mM NaCl,2mM MgCl₂·6H₂O,pH 7.4。

2.根據權利要求1所述的傳感器，其特征在于，所述AuNPs包被液的制備方法如下：1)在圓底燒瓶中加入超純水196mL，1％氯金酸1mL加熱至沸騰；然后加入1％檸檬酸三鈉3mL，反應一段時間后可見液體顏色逐漸加深至黑色，而后變為櫻桃紅色，5min后停止加熱，冷卻至室溫，得到AuNPs溶液，避光4℃保存；

2)以PBS緩沖液為溶劑配制10％BSA溶液，每1mL AuNPs溶液中加入20μL BSA溶液，混合孵育40min即得AuNPs包被液。

3.權利要求1或2所述傳感器在檢測汞離子中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述檢測為定性檢測或定量檢測。