[發明專利]一種污水地下滲濾系統微生物代謝產物檢測方法

有效

• 申請號: 201910247216.0
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109975455B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 李英華;楊蕾;李海波;蘇菲;戴陸明;楊晨
• 申請（專利權）人: 東北大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 沈陽東大知識產權代理有限公司 21109
• 代理人: 寧佳

1.一種污水地下滲濾系統微生物代謝產物檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，樣品液提取：

(1)土壤樣品采集：在SWIS中采集土壤樣品；

(2)樣品滅活：將土壤樣品進行滅活處理；

(3)按配比為，滅活后樣品：色譜級提取劑=1:(2~3)，單位為g:ml或ml:ml，所述的滅活后樣品為固體狀或液體狀，當為固體時，以質量計，當為液體時，以體積計，向滅活后樣品中加入色譜級提取劑，色譜級提取劑為甲醇，進行提取，提取方式為超聲與離心相結合提取，具體為：20~25℃下超聲提取5~15min后，將提取樣品離心5~15min，取上清液，并重復該超聲與離心操作三次，其中，所述的離心轉速為2000rmp，離心溫度為20~25℃；

(4)合并上清液，進行干燥去除水分，形成樣品粉末，采用提取劑復溶，攪拌混合均勻后，13000rmp條件下離心5~10min，取上清液，即為樣品液，取樣品液于進樣小瓶的內襯管中進樣，進行檢測；

步驟2，樣品液檢測：

采用UPLC－MS技術對樣品液進行檢測，具體過程為：

(1)進行色譜分離：具體色譜分離參數為：

對樣品液進行洗脫，流動相為混合組分，包括流動相A和流動相B，流動相A為水，流動相B為乙腈，流速為0.1~0.3mL/min，并保證流速不變，色譜柱溫度為25~35℃，色譜柱為Agilent Zorbax SB- C18，采用梯度洗脫，洗脫時間為59min，具體方式為：

0~10分鐘，流動相B由15%勻速升至65%，流動相A由85%勻速降至35%；

10~15min，流動相B由65%勻速升至80%，流動相A由35%勻速降至20%；

15~30min，流動相B由80%勻速升至95%，流動相A由20%勻速降至5%；

30~38min，流動相B由95%勻速升至99%，流動相A由5%勻速降至1%；

38~55min，流動相B保持在99%，流動相A保持在1%；

55~56min，流動相B由99%勻速降至15%，流動相A由1%勻速升至85%；

56~59min，流動相B保持在15%，流動相A保持在85%；

(2)質譜檢測分析：

色譜分離后進行離子掃描，毛細管電壓為1~5KV，干燥氣溫度150~200℃，干燥氣流量4~8 L/min，輔助氣壓力1.0~3.0Bar，質荷比采集范圍：50~1800m/z，獲得總離子流圖，完成污水地下滲濾系統微生物代謝產物檢測，其中：所述的離子掃描采用的離子源采用大氣壓離子源、基質輔助激光解析電離源或快原子轟擊源中的一種。

2.根據權利要求1所述的污水地下滲濾系統微生物代謝產物檢測方法，其特征在于，所述的步驟1(1)中，樣品為SWIS土柱中土壤樣品。

3.根據權利要求1所述的污水地下滲濾系統微生物代謝產物檢測方法，其特征在于，所述的步驟1(2)中，滅活方式為以下方式中的一種：

(1)液氮冷凍，低溫滅活：所述的液氮冷凍的溫度為-196℃；

(2)高氯酸稀釋：向樣品中加入高氯酸溶液，高氯酸溶液體積與樣品質量比為2：1，單位為ml:g，混合稀釋5~20min后，1000r/min下離心5~15min，提取上清液；

(3)甲醇稀釋：向樣品中加入溫度為-65℃~-58℃的甲醇，甲醇體積與樣品質量比為2：1，單位為ml:g，混合稀釋10~20min后，1000r/min下離心5~15min，提取上清液；

(4)高溫滅活：向樣品中加入溫度為95-100℃的水，水體積與樣品質量比為2：1，單位為ml:g，混合均勻，1000r/min下離心10-20min，提取上清液。

4.根據權利要求1所述的污水地下滲濾系統微生物代謝產物檢測方法，其特征在于，所述的步驟1(4)中，干燥方式為真空下旋轉蒸發，真空度為95~98kpa，旋轉轉速為20~200r/min，旋轉時間為20~30min，電壓為220v，水槽加熱溫度為25-90℃。

5.根據權利要求1所述的污水地下滲濾系統微生物代謝產物檢測方法，其特征在于，所述的步驟2(2)中，離子掃描模式為正離子掃描或負離子掃描，其中：

當為正離子掃描時：毛細管電壓為3~5KV；當為負離子掃描時：毛細管電壓為1~4KV。