[發(fā)明專利]一種環(huán)狀抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910246779.8 | 申請日： | 2019-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN109762051B | 公開（公告）日： | 2022-02-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王建浩;王建鵬;滕一萬;賈文靜;邱琳;蔣林伯;雷曉玲;劉曉騫 | 申請（專利權(quán)）人： | 常州大學(xué) |
| 主分類號： | C07K14/00 | 分類號： | C07K14/00;C07K1/04;A61K38/16;A61P31/04 |
| 代理公司： | 常州市英諾創(chuàng)信專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32258 | 代理人： | 謝新萍 |
| 地址： | 213164 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 環(huán)狀 抗菌 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明屬于抗菌劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種環(huán)狀抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用。所述環(huán)狀抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，為分子內(nèi)環(huán)狀多肽，其中，多肽位于β轉(zhuǎn)角處的脯氨酸替換成DPRO?LPRO來增加β?轉(zhuǎn)彎的穩(wěn)定性，通過其氨基酸序列中的兩個半胱氨酸殘基之間形成分子內(nèi)二硫鍵，形成具有分子內(nèi)環(huán)狀結(jié)構(gòu)。本發(fā)明抗菌肽其氨基酸序列短、結(jié)構(gòu)簡單、合成方便、抗菌活性高，可用于白色念珠菌引起的疾病的預(yù)防與治療。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于抗菌劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種環(huán)狀抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)
耐藥性真菌病原體的出現(xiàn)迫切需要具有改善的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)的新一代抗真菌藥物。抗菌肽(AMPs)主要是由少于50個氨基酸組成的陽離子和兩親性肽，由多種生物體產(chǎn)生，用于殺死各種入侵細菌，真菌和病毒，同時對生物體本身具有低細胞毒性。由于它們具有殺微生物作用的新機制和抗藥性，它們已被公認為是抗菌藥物的金礦。目前在臨床上抗真菌的藥物種類有限，以抗生素為主，但是抗生素容易產(chǎn)生耐藥性。
防御素是植物和動物中廣泛傳播的抗菌肽,它具有由幾個二硫橋穩(wěn)定的緊湊三維結(jié)構(gòu)。植物防御素是入侵者的先天防御線，具有抗真菌活性，同時對哺乳動物細胞系的毒性有限。具體而言，據(jù)報道，從白蕓豆中分離出的防御素具有抗真菌和抗菌活性，甚至在胰蛋白酶處理后仍保留。盡管防御素是潛在的候選藥物，但仍需要解決一些障礙：1)蛋白質(zhì)難以分離；2)defesins的生物合成效率低；3)體內(nèi)活性和耐藥性仍有待提高。因此，肽的生物活性形式的半合成具有前景。
雖然生物學(xué)家致力于解決防御素蛋白的晶體結(jié)構(gòu)和生物活性，但是這種蛋白質(zhì)家族的部分序列受到越來越多的關(guān)注。幾種結(jié)構(gòu)參數(shù)，如兩親性，疏水性，疏水動量，α螺旋度和凈正電荷，在抗菌肽的生物活性中起重要作用。因此，開發(fā)一種類防御素的抗菌肽具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種新型抗菌肽，該抗菌肽對白色念珠菌具有抗菌活性。
本發(fā)明提供的一種新型環(huán)狀抗菌肽，為分子內(nèi)環(huán)狀多肽，通過其氨基酸序列中的2個半胱氨酸殘基形成分子內(nèi)二硫鍵，形成環(huán)狀。其氨基酸序列為如序列表SEQ ID No.1的氨基酸序列所示。
具體的，所述多肽通過位于β轉(zhuǎn)角處的兩個脯氨酸DPRO-LPRO來增加β-轉(zhuǎn)彎的穩(wěn)定性，通過其氨基酸序列中的兩個半胱氨酸殘基之間成分子內(nèi)二硫鍵，進一步加強其穩(wěn)定性。
第19位點的氨基酸為非天然氨基酸；所述非天然氨基酸包括但不限于非天然氨基酸L-1-奈丙氨酸，(L-1-Nal，縮寫E46)，非天然氨基酸L-2-奈丙氨酸，(L-2-Nal，縮寫E48)，非天然氨基酸Tic(縮寫E58)，從而增加整個環(huán)狀多肽的兩親性。
本發(fā)明的抗菌肽全序列包括但不限于：(抗菌肽AM-22)，(抗菌肽AM-23)(抗菌肽AM-24)等。
本發(fā)明多肽的序列特征：多肽結(jié)構(gòu)中半胱氨酸中的巰基形成分子內(nèi)二硫鍵；拓撲結(jié)構(gòu)：環(huán)狀；結(jié)構(gòu)特點：富含堿性氨基酸。
此外，本發(fā)明還提供了上述環(huán)狀多肽的制備方法，包括以下步驟：
(1)采用固相合成法合成多肽序列；
(2)對步驟(1)制備得到的多肽進行環(huán)化；
(3)純化步驟(2)制備得到的多肽。
其中，步驟(2)環(huán)化方法優(yōu)選為氧化法；具體為：凍干后用NaHCO3和Na2CO3來做巰基脫氫反應(yīng)，使兩個半胱氨酸的巰基形成二硫鍵，從而形成環(huán)狀。
步驟(3)所述純化方法優(yōu)選采用HPLC進行純化。
本發(fā)明制備得到的環(huán)狀多肽用作白色念珠菌感染的廣譜抗菌藥物。
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