[發明專利]一種檢測免疫檢查點抗體活性的方法

有效

• 申請號: 201910244673.4
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN111748580B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 黃俊杰;吳曉云;李勝峰;俞金泉
• 申請（專利權）人: 百奧泰生物制藥股份有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/52;C12N5/10;G01N33/53
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 向薇;曾旻輝

1.一種檢測免疫檢查點抗體活性的方法，其特征在于，包括

a)準備抗原呈遞類似細胞，所述抗原呈遞類似細胞表面上展示T細胞受體激活物和免疫檢查點配體；

其中，所述T細胞受體激活物為抗CD3抗體或抗原結合片段；所述免疫檢查點配體選自PVR、PD-L1、PD-L2中的一種或多種；

b)準備效應細胞，所述效應細胞在其表面上展示T細胞受體和免疫檢查點受體，所述效應細胞的基因組中整合有報告基因；所述T細胞受體激活物與所述T細胞受體相互作用，激活所述報告基因表達報告蛋白；所述免疫檢查點配體與所述免疫檢查點受體相互作用，激活或抑制所述報告基因表達所述報告蛋白；

其中，所述免疫檢查點受體選自CD226、TIGIT、PD-1中的一種或多種；

c)培養所述抗原呈遞類似細胞和所述效應細胞，并加入抗體；所述抗體為待檢測的免疫檢查點抗體；以及

d)檢測所述報告蛋白的信號，以指示所述抗體；

所述T細胞受體激活物包括序列為SEQ ID NO.3的重鏈可變區，和序列為SEQ ID NO.7的輕鏈可變區;

所述T細胞受體激活物與信號肽連接，所述信號肽的序列為SEQ ID NO.1；

所述效應細胞選自T細胞;

所述報告基因與啟動子連接，所述啟動子為IL-2啟動子，所述啟動子的序列為SEQ IDNO.13、SEQ ID NO.14或SEQID NO.15。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述效應細胞選自Jurkat、Hut-78、CEM或原代T細胞。

3.根據權利要求1至2中任意一項所述的方法，其特征在于，所述報告基因包含編碼以下蛋白質的基因：

熒光素酶、β-內酰胺酶、CAT、SEAP、熒光蛋白和可量化基因產物。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，

所述抗體抑制所述免疫檢查點配體與所述免疫檢查點受體相互作用。

5.一種檢測免疫檢查點抗體活性的方法，其特征在于，包括

a)準備CHO細胞，所述CHO細胞在其表面上展示OKT3scFv、PVR和PD-L1；所述OKT3scFv包括序列如SEQ ID NO.3所示的重鏈可變區和序列如SEQ ID NO.7所示的輕鏈可變區；

b)準備Jurkat細胞，所述Jurkat細胞在其表面上展示TCR、TIGIT、CD226和PD-1，所述Jurkat細胞的基因組中整合有熒光素酶報告基因；所述OKT3scFv與所述TCR相互作用，激活所述熒光素酶報告基因表達熒光素酶；

所述PVR與所述TIGIT相互作用，抑制所述熒光素酶報告基因表達所述熒光素酶；所述PVR與所述CD226相互作用，激活所述熒光素酶報告基因表達所述熒光素酶；所述PD-L1與所述PD-1相互作用，抑制所述熒光素酶報告基因表達所述熒光素酶；

c)培養所述CHO細胞和所述Jurkat細胞，并加入抗體；所述抗體為待檢測的免疫檢查點抗體；以及

d)檢測所述熒光素酶的信號，以指示所述抗體。