[發明專利]一種檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201910244373.6
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN110031575A
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發明（設計）人: 魏建華;吳劍光;魏霜;劉玉莉;劉碧琳
• 申請（專利權）人: 汕頭出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜，其特征在于，具有6個特征峰，其中保留時間最長的所述特征峰的峰面積最大；以該峰面積最大的所述特征峰為參照峰，6個所述特征峰的相對保留時間tg分別為：0.085，0.099，0.133，0.160，0.271，1.000，RSD％<2％。

2.如權利要求1所述的檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜，其特征在于，6個所述特征峰的相對峰面積分別為：0.0207，0.0790，0.0535，0.0144，0.0290，1.000，RSD<1.0。

3.一種如權利要求1所述的檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟一、供試品溶液的制備：稱取檀香紫檀心材部分木屑，加入甲醇、高純水，震搖，超聲提取，濾紙過濾，微孔濾膜過濾，得到所述供試品溶液；

步驟二、HPLC檢測：將所述步驟一得到的供試品溶液進行HPLC檢測，色譜條件為：Agilent Eclipse XDB-C18，填料粒徑5μm，柱長250mm，柱內徑4.6mm；以水為流動相A，乙腈為流動相B，采用梯度洗脫方式：從0～20min，流動相B的體積百分含量由8％提高至23％，流動相A的體積百分含量由92％降低至77％；從20～33min,流動相B的體積百分含量為23％，流動相A的體積百分含量為77％；從33～43min，流動相B的體積百分含量由23％提高至30％，流動相A的體積百分含量由77％降低至70％；從43～53min,流動相B的體積百分含量30％，流動相A的體積百分含量為70％；從53～69min，流動相B的體積百分含量由30％提高至38％，流動相A的體積百分含量由70％降低至62％；從69～76min，流動相B的體積百分含量38％，流動相A的體積百分含量為62％；從76～91min，流動相B的體積百分含量由38％提高至49％，流動相A的體積百分含量由62％降低至51％；從91～92min，流動相B的體積百分含量49％，流動相A的體積百分含量為51％；從92～95min，流動相B的體積百分含量由49％降低至8％，流動相A的體積百分含量由51％提高至92％；從95～103min，流動相B的體積百分含量8％，流動相A的體積百分含量為92％；檢測波長為290nm；柱溫30℃；流速1.0mL/min；得到HPLC檢測結果。

4.如權利要求3所述的構建方法，其特征在于，所述步驟一具體為：稱取檀香紫檀心材部分木屑0.2g，置于50mL離心管中，加入5mL甲醇、5mL高純水，震搖5min，超聲提取5min，濾紙過濾，再以0.2μm的微孔濾膜過濾，得到所述供試品溶液。

5.如權利要求3所述的構建方法，其特征在于，還包括步驟三、分析比較多批來源不同的檀香紫檀的HPLC檢測結果，得到由其共有特征峰構成的所述檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜。

6.如權利要求5所述的構建方法，其特征在于，所述步驟三具體為：將所述多批來源不同的檀香紫檀的HPLC檢測結果導入國家藥典委員會頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2012版)”，選取時間窗寬度為0.2min，以中位數生成對照譜圖，經過多點校正后自動匹配，生成檀香紫檀指紋圖譜共有模式，并計算所述多批來源不同的檀香紫檀的HPLC檢測結果與該檀香紫檀指紋圖譜共有模式的相似度，使得所述相似度在0.9以上。

7.如權利要求1所述的檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜在鑒別檀香紫檀真偽方面的應用。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，疑似檀香紫檀的樣品的HPLC指紋圖譜與所述檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜對比，根據其相似度是否大于0.9以及共有特征峰的有無，進行檀香紫檀真偽鑒別。

9.如權利要求7所述的應用，其特征在于，采用如權利要求3或4所述的方法獲得所述疑似檀香紫檀的樣品的HPLC指紋圖譜。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，將所述疑似檀香紫檀的樣品的HPLC指紋圖譜通過相似度分析軟件與所述檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜，以6個共有特征峰7.533min、8.731min、11.721min、14.150min、23.895min、88.165min，進行多點校正，并以所述共有特征峰作為Mark峰進行匹配；對于HPLC指紋圖譜與所述檀香紫檀HPLC標準指紋圖譜的相似度≥0.9，且特征峰的相對保留時間與對應的所述共有特征峰的相對保留時間0.085，0.099，0.133，0.160，0.271，1.000，RSD％<2％的所述疑似檀香紫檀的樣品，鑒定結果為檀香紫檀；否則是否是檀香紫檀存疑。