[發明專利]體外誘導人臍帶間充質干細胞向神經細胞分化

有效

• 申請號: 201910241211.7
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN109825476B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 陳飛;陳靚
• 申請（專利權）人: 廣州漢密頓生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079
• 代理公司: 武漢集源知識產權代理事務所(普通合伙) 42316
• 代理人: 劉勇

本發明公開了體外誘導人臍帶間充質干細胞向神經細胞分化。hUC?MSCs經含有赤芝酸A的條件培養基誘導培養6d后，倒置顯微鏡觀察結果顯示，與陰性對照組相比，陽性對照組出現明顯的神經樣細胞分化，5μg/mL的赤芝酸A組和10μg/mL的赤芝酸A組也出現明顯的神經樣細胞分化，且10μg/mL的赤芝酸A組比5μg/mL的赤芝酸A組分化更明顯，突觸結構更為顯著，即：赤芝酸A可以有效誘導hUC?MSCs向神經細胞分化，可以用作hUC?MSCs的神經細胞分化誘導劑，用于制備誘導hUC?MSCs向神經細胞分化的條件培養基。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及臍帶間充質干細胞的誘導分化，具體涉及體外誘導人臍帶間充質干細胞向神經細胞分化。

背景技術

中樞神經系統損傷的修復，一直是神經科學領域的研究熱點，曾被認為是不可攻破的難題。然而隨著科技的發展，國內外越來越多的研究表明間充質干細胞在一定程度上可促進中樞神經系統損傷的修復并可改善神經功能。

目前認為間充質干細胞治療神經系統損傷的可能機制有：①替代作用：重建神經細胞，修復神經環路。②營養作用：促進損傷區的血管再生并可分泌神經營養因子，促進損傷的修復。③免疫抑制作用：減少神經細胞的凋亡。現已發現人體多種組織器官如骨髓、脂肪、肝臟、肺、臍血、臍帶、胎盤等均存在間充質干細胞。其中臍帶及臍血間充質干細胞以其來源廣泛、易獲得、較原始、免疫原性較低并不受倫理及法律的限制等諸多優點成為科研人員的研究焦點，已有研究表明未經誘導的人臍血單核細胞中存在神經樣細胞及神經細胞標志物的表達，但因其數量過少不足以直接作為種子細胞發揮治療作用。且研究發現骨髓間充質干細胞在體外可分化為神經干細胞，但骨髓間充質干細胞會隨著供者年齡的增長而增殖分化能力降低。人臍帶間充質干細胞(human?umbilical?cordmesenchymal?stem?cells,hUC-MSCs)生物學特性類似于骨髓間充質干細胞，具有很強的增殖分化能力。

王亮等(參考文獻：白藜蘆醇體外誘導人臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞，河北醫科大學，碩士學位論文)體外培養分離純化的人臍帶間充質干細胞，觀察其生長情況及形態，并檢測其表面標志物，探索白藜蘆醇(Resveratrol)在不同濃度下體外定向誘導hUC-MSCs分化為神經樣細胞的條件及作用，結果發現：Resveratrol在一定濃度下可以在體外有效地將hUC-MSCs誘導分化成神經樣細胞，30mg/L為其相對合適的誘導濃度，表達巢蛋白(Nestin)和神經元特異性烯醇化酶(NSE)。

南成睿等(參考文獻：川芎嗪體外誘導人臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞，河北醫科大學，碩士學位論文)從新生兒臍帶分離并培養臍帶間充質干細胞，對其細胞表型進行鑒定，觀察不同濃度川芎嗪在體外誘導人臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的作用，初步探討人臍帶間充質干細胞向神經樣細胞分化的機制。結果發現：hUC-MSCs可以在體外穩定培養、傳代，并保持較高的增殖能力；傳代后的hUC-MSCs均表達間充質干細胞表面標志CD73、CD90和CD105，不表達造血細胞表面標志CD34、CD45、CD19、CD11b和組織相容性抗原HLA-DR(MHC-Ⅱ)；川芎嗪在體外可有效誘導hUC-MSCs分化成神經樣細胞，并表達成熟神經細胞標志神經元特異性烯醇化酶(NSE)、神經絲蛋白(NF-H)。

閆冬冬等(參考文獻：黃連素體外誘導人臍帶間充質干細胞向神經樣細胞分化，河北醫科大學，碩士學位論文)對分離培養的hUC-MSCs生物學特性進行鑒定，探討黃連素在體外定向誘導hUC-MSCs向神經細胞分化中的作用和條件，為定向誘導hUC-MSCs向神經分化以及在臨床上的應用提供理論支持和實驗基礎。結果發現：黃連素在體外可誘導hUC-MSCs分化成神經樣細胞，并表達神經元標志(NSE)、神經膠質細胞表面標志(GFAP)、神經干細胞標志(Nestin)，以黃連素濃度為100μg/ml組最為明顯，且存活時間最長。