[發(fā)明專(zhuān)利]mmu-miR-218-5p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910239793.5
• 申請(qǐng)日: 2019-03-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110038026B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爭(zhēng)光;曹丁壬;梁晶婕;邱寒峰;譚強(qiáng);施爽
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K31/713
• 分類(lèi)號(hào): A61K31/713;A61P15/18
• 代理公司: 浙江千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

本發(fā)明公開(kāi)了一種微小RNA——mmu?miR?218?5p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)微小RNA表達(dá)譜微陣列實(shí)驗(yàn)及生物信息學(xué)方法篩選出調(diào)控子宮容受階段并且在著床位點(diǎn)起關(guān)鍵作用的微小RNA：mmu?miR?218?5p，經(jīng)試驗(yàn)證明mmu?miR?218?5p對(duì)胚胎著床有極其顯著的抑制作用，提示其可作為避孕藥物使用，為新藥篩選提供了新的途徑。

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及mmu-miR-218-5p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。

(二)背景技術(shù)

近年來(lái)，腫瘤組織中miR-218-5p在細(xì)胞遷移、侵襲和微血管生成等過(guò)程的重要作用逐漸受到關(guān)注，已報(bào)道的文獻(xiàn)證實(shí)，miR-218-5p對(duì)腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)和擴(kuò)散都有重要的影響。在胃癌中miR-218-5p通過(guò)其靶基因ROBO1起到抑制胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。在口腔鱗癌細(xì)胞系中miR-218-5p通過(guò)CD44-ROCK通路抑制細(xì)胞侵襲。同時(shí)miR-218可負(fù)向調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力和平面管腔形成能力，進(jìn)而影響微血管的形成。與腫瘤的遷移、微血管形成類(lèi)似，在胚胎著床過(guò)程中，細(xì)胞的遷移、侵襲以及微血管的生成對(duì)于著床的成敗有著至關(guān)重要的作用。但目前，miR-218-5p對(duì)胚胎著床的調(diào)控作用尚未證實(shí)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)miR-218-5p在胚胎著床的窗口期顯著下降。在miRBase查詢(xún)比對(duì)發(fā)現(xiàn)，miR-218-5p在不同物種中具有保守性，人源的miR-218-5p與鼠源的miR-218-5p的一致性達(dá)到了100％，因此可以選擇小鼠為模式動(dòng)物，研究miR-218-5p對(duì)胚胎著床的影響并開(kāi)發(fā)促進(jìn)或抑制胚胎著床的藥物。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供mmu-miR-218-5p在抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

微小RNA mmu-miR-218-5p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。

具體的，所述mmu-miR-218-5p序列如下：

5’-UUGUGCUUGAUCUAACCAUGU-3’。

優(yōu)選的，所述mmu-miR-218-5p經(jīng)分子修飾獲得的更穩(wěn)定的雙鏈小RNA用于制備所述藥物，具體的，所述分子修飾為：全部堿基甲基化修飾+5'端前3個(gè)堿基UUG和3'端前4個(gè)堿基AUGU之間進(jìn)行硫代修飾+3'末端進(jìn)行膽固醇修飾。與未經(jīng)修飾的雙鏈小RNA相比，修飾后的RNA與細(xì)胞膜親和力更高，細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染試劑用量顯著減少，特別適合動(dòng)物體內(nèi)干擾實(shí)驗(yàn)，并且在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中具有更高的穩(wěn)定性和抑制效果，可以采用全身注射或局部注射等多種方式給藥，操作簡(jiǎn)便。

進(jìn)一步，所述藥物為避孕藥物。

具體的，所述藥物制成注射用制劑，通過(guò)注射到受體子宮達(dá)到抑制胚胎著床的作用。

本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明提供了mmu-miR-218-5p在抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用，經(jīng)試驗(yàn)證明mmu-miR-218-5p對(duì)胚胎著床有極其顯著的抑制作用，提示其可作為避孕藥物使用，為新藥篩選提供了新的途徑。

(四)附圖說(shuō)明

圖1為D1、D4、D5IMS、D5IIS子宮內(nèi)膜中mmu-miR-218-5p的變化趨勢(shì)；

圖2為小鼠不同發(fā)情階段的陰道涂片結(jié)果：A：發(fā)情前期；B：發(fā)情期；C：發(fā)情后期；D：間情期；

圖3為qPCR法驗(yàn)證差異表達(dá)mmu-miR-218-5p的變化；

圖4為假孕模型中mmu-miR-218-5p的變化；

圖5為延時(shí)模型與延時(shí)激活模型中mmu-miR-218-5p的相對(duì)含量柱狀圖；