[發(fā)明專利]mmu-miR-375-3p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910238971.2
• 申請(qǐng)日: 2019-03-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110251528B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爭(zhēng)光;邱寒峰;褚玲娜;曹丁壬;梁晶婕;譚強(qiáng);施爽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/7105
• 分類號(hào): A61K31/7105;A61P15/18
• 代理公司: 浙江千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

本發(fā)明公開(kāi)了一種微小RNA——RNA mmu?miR?375?3p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)微小RNA表達(dá)譜微陣列實(shí)驗(yàn)及生物信息學(xué)方法篩選出調(diào)控子宮容受階段并且在著床位點(diǎn)起關(guān)鍵作用的微小RNA：RNA mmu?miR?375?3p，經(jīng)試驗(yàn)證明RNA mmu?miR?375?3p對(duì)胚胎著床有極其顯著的抑制作用，提示其可作為避孕藥物使用，為新藥篩選提供了新的途徑。

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及mmu-miR-375-3p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。

(二)背景技術(shù)

miRNA是一種長(zhǎng)度在22nt左右的內(nèi)源性非編碼短鏈RNA分子，能夠靶向裂解mRNA或抑制翻譯過(guò)程等方式在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA具有較高的同源性，廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，參與多種生物生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、疾病防御等進(jìn)程的調(diào)控，其在不同生理狀態(tài)下的特異性表達(dá)更使其有望成為檢測(cè)特定生理過(guò)程的分子標(biāo)記物。此外，miRNA能夠被多種細(xì)胞以不同形式選擇性分泌到微環(huán)境當(dāng)中，作為一種介質(zhì)參與細(xì)胞間的交流對(duì)話。miR-375是哺乳動(dòng)物常見(jiàn)的miRNA之一，存在于多種細(xì)胞和組織中。研究證實(shí)，miR-375已被證實(shí)參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、微血管形成等過(guò)程，并在其中發(fā)揮促癌或抑癌基因作用。而在胚胎著床過(guò)程中，也發(fā)生遷移、分化、增殖、微血管形成等生理過(guò)程，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞與胚胎之間會(huì)進(jìn)行相互侵入，細(xì)胞增殖分化，胚胎滋養(yǎng)層侵入子宮內(nèi)膜上皮，微血管生成。雖然已經(jīng)證實(shí)了miR-375在腫瘤細(xì)胞的遷移、分化、增殖、微血管形成中的作用，但尚無(wú)文獻(xiàn)證實(shí)其在胚胎著床過(guò)程中的作用。通過(guò)miRBase查詢比對(duì)發(fā)現(xiàn)，miR-375-3p在不同物種中具有保守性，人源的miR-375-3p與鼠源的miR-375-3p的一致性達(dá)到了100％，因此可以選擇小鼠為模式動(dòng)物，進(jìn)行miR-375-3p對(duì)胚胎著床影響的研究，開(kāi)發(fā)抑制或促進(jìn)胚胎著床的藥物。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供mmu-miR-375-3p在抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

微小RNA mmu-miR-375-3p在制備抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用。

具體的，所述mmu-miR-375-3p序列如下：5’-UUUGUUCGUUCGGCUCGCGUGA -3’。

優(yōu)選的，所述mmu-miR-375-3p經(jīng)分子修飾獲得的更穩(wěn)定的雙鏈小RNA用于制備所述藥物，具體的，所述分子修飾為：全部堿基甲基化修飾+5'端前3個(gè)堿基UUU和3'端前4個(gè)堿基GUGA之間進(jìn)行硫代修飾+3'末端進(jìn)行膽固醇修飾。與未經(jīng)修飾的雙鏈小RNA相比，修飾后的RNA與細(xì)胞膜親和力更高，細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染試劑用量顯著減少，特別適合動(dòng)物體內(nèi)干擾實(shí)驗(yàn)，并且在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中具有更高的穩(wěn)定性和抑制效果，可以采用全身注射或局部注射等多種方式給藥，操作簡(jiǎn)便。

進(jìn)一步，所述藥物為避孕藥物。

具體的，所述藥物制成注射用制劑，通過(guò)注射到受體子宮達(dá)到抑制胚胎著床的作用。

本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明提供了mmu-miR-375-3p在抑制胚胎著床的藥物中的應(yīng)用，經(jīng)試驗(yàn)證明mmu-miR-375-3p對(duì)胚胎著床有極其顯著的抑制作用，提示其可作為避孕藥物使用，為新藥篩選提供了新的途徑。

(四)附圖說(shuō)明

圖1為D1、D4、D5IMS、D5IIS子宮內(nèi)膜中mmu-miR-375-3p的變化趨勢(shì)；

圖2為小鼠不同發(fā)情階段的陰道涂片結(jié)果：A：發(fā)情前期；B：發(fā)情期；C：發(fā)情后期；D：間情期；

圖3為qPCR法驗(yàn)證差異表達(dá)mmu-miR-375-3p的變化；

圖4為假孕模型中mmu-miR-375-3p的變化；

圖5為延時(shí)模型與延時(shí)激活模型中mmu-miR-375-3p的相對(duì)含量柱狀圖；