[發(fā)明專利]非梗阻性無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910215442.0
• 申請日: 2019-03-21
• 公開（公告）號: CN109943631A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉睿智;張紅國;魏本杰;王瑞雪;李博;蘇鶴
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林省銀豐生物工程技術(shù)有限公司;吉林大學(xué);銀豐生物工程集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 于曉慶

非梗阻性無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒，涉及無精子癥診斷領(lǐng)域，解決了男性不育癥存在的臨床診斷困難的問題。本發(fā)明的非梗阻性無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒，包括特異性PCR引物、PCR緩沖液、dNTPs和DNA聚合酶，特異性PCR引物為檢測非梗阻性無精子癥TEX11基因中第69826819位突變位點的一組特異性引物。通過設(shè)計特異性引物SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，該特異性引物具有較高的特異性，采用由上述特異性引物組成的非梗阻性無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒檢測男性患者TEX11基因中第69826819位突變位點，其基因突變的檢出率為100％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及無精子癥的診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種非梗阻性無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒。

背景技術(shù)

男性不育癥(Male Infertility)，是指夫妻婚后有正常性生活，未采用任何避孕措施，由于男方原因而致妻子不受孕者。男性不育癥嚴(yán)重影響男性健康，根據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查顯示，在育齡期約有8％的夫婦患有不育的疾患，據(jù)此推算全世界約有5000萬至8000萬人患有不育問題，并且呈逐年增加趨勢。其中男性原因?qū)е虏挥壤话悴坏陀?0％。男性不育癥根據(jù)臨床表現(xiàn)分為絕對不育和相對不育；根據(jù)病程可分為原發(fā)不育和繼發(fā)不育。

男性不育癥的發(fā)病原因主要有生殖道梗阻、炎癥或免疫性因素以及性功能障礙等等，但高達60～75％的患者是找不到原因，這種情況被稱之為特發(fā)性男性不育，屬于非梗阻性無精癥(non-obstructive azoospermia，NOA)。根據(jù)組織病理學(xué)分類，主要分為三種類型，分別為：唯支持細胞綜合征、精子發(fā)生停滯或稱為成熟抑制及精子發(fā)生低下。目前臨床上能夠檢測的男性不育癥的因素為：染色體核型和AZF缺失情況。AZF基因是1976年，Tiepolo等人通過核型分析發(fā)現(xiàn)了6例無精子癥患者的Y染色體長臂的微缺失并提出了無精子因子即AZF概念，隨后的研究將其定位于Yq11.23，AZF并不是單一基因，而是功能上相互關(guān)聯(lián)的基因家族，在精子發(fā)生、發(fā)育和成熟中起到重要作用。

多種基因突變檢測技術(shù)主要包括蛋白截斷試驗、單鏈構(gòu)象多態(tài)性、異源雙鏈分析化、變性梯度凝膠電泳和溫度梯度凝膠電泳等。但是上述這些檢測方法都存在一定的局限性，極大的限制了基因突變的檢出率。

正是由于臨床上對絕大部分的NOA患者的真正原因仍然不清楚，從而導(dǎo)致臨床上針對NOA的診斷存在很大的困難。基于此，亟待需要研制出一種無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒，輔助診斷非梗阻性無精子癥。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決非梗阻性無精子癥存在的臨床診斷困難的問題，本發(fā)明提供一種非梗阻性無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒。

本發(fā)明為解決技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的非梗阻性無精子癥輔助診斷基因檢測試劑盒，包括特異性PCR引物、PCR緩沖液、dNTPs和DNA聚合酶，所述特異性PCR引物為檢測NOA患者TEX11基因中第69826819位突變位點的一組特異性引物。

作為優(yōu)選的實施方式，所述特異性PCR引物的上游引物序列如SEQ ID NO：1所示，所述特異性PCR引物的下游引物序列如SEQ ID NO：2所示。

位于X染色體上的TEX11基因，是X染色體編碼的精細胞特異蛋白，在睪丸精原細胞和精母細胞中有豐富的表達，與精子發(fā)生形成有很大的聯(lián)系。已有研究表明：破壞該基因的表達會導(dǎo)致無精子癥，這表明生精障礙與特定性別染色體的減數(shù)分裂特異性基因有關(guān)。