[發明專利]菵草MYC3基因及其應用有效
| 申請號： | 201910205717.2 | 申請日： | 2019-03-18 |
| 公開（公告）號： | CN109837288B | 公開（公告）日： | 2020-07-28 |
| 發明（設計）人： | 崔海蘭;王京京;李香菊;陳景超;黃兆峰 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院植物保護研究所 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12N15/11;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黃爽 |
| 地址： | 100091 北京市海淀區圓*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 菵草 myc3 基因 及其 應用 | ||
1.用于檢測菵草MYC3基因的特異性PCR引物，其特征在于，包括MYC3-F1和MYC3-R1，核苷酸序列分別如SEQ ID NO:2和3所示。
2.含有權利要求1所述引物的檢測試劑或試劑盒。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括與所述引物配合使用的熒光染料。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光染料為SYBR Green I。
5.權利要求1所述PCR引物的以下任一應用：
1）在鑒定不同菵草材料對磺酰脲類除草劑抗性中的應用；
2）作為不同菵草材料對磺酰脲類除草劑抗性的標志物中的應用；
3）在鑒定抗磺酰脲類除草劑的菵草材料中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述磺酰脲類除草劑為甲基二磺隆。
7.檢測菵草MYC3基因表達量的方法，其特征在于，所述方法包括：提取待測菵草總RNA，反轉錄為cDNA；然后，利用權利要求1所述引物，以cDNA為模板，進行實時熒光定量PCR擴增；同時設置內參基因，計算MYC3基因的相對表達量。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述內參基因選自UBQ、CAP及GADPH中的至少一個，用于擴增各內參基因的引物分別如下：
UBQ-F：5ˊ-CAAGAAGAAGACGTACACCAAG-3ˊ
UBQ-R: 5ˊ-GACCTTGTAGAACTGGAGGAG-3ˊ；
CAP-F:5ˊ-AAGCCCCAATCAAAATCAACACGAA-3ˊ
CAP-R: 5ˊ-AAGAACACCAAGACCCCCTGC-3ˊ；
GADPH-F：5ˊ-AGGTTATCAATGACAAGTTTGG-3ˊ
GADPH-R：5ˊ-ATCAACAGTCTTCTGGGTAGC-3ˊ。
9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，PCR反應體系和反應程序如下：
PCR反應體系：2.5 mM dNTP混合液2 μL，10×PCR Buffer 2.5 μL，10 μM上、下游引物各0.5 μL，5 U/μL Taq DNA聚合酶0.5 μL，cDNA 1 μL，加ddH2O至25 μL；
PCR反應程序：94℃預變性5min；94℃變性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s，共35個循環；72℃延伸5min。
10.權利要求7-9任一項所述方法在鑒定不同菵草材料對磺酰脲類除草劑抗性中的應用，其中，所述應用包括根據MYC3基因的相對表達量來鑒定不同菵草材料對磺酰脲類除草劑的抗性。
11.根據權利要求10所述的應用，其特征在于，所述磺酰脲類除草劑為甲基二磺隆。
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