[發明專利]一種豚草花粉變應原浸提物、其浸液及其制備方法

有效

• 申請號: 201910204890.0
• 申請日: 2019-03-18
• 公開（公告）號: CN109939227B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 周俊雄;尹佳;高亞娜;王茜;文利平;路蒨;支玉香
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院
• 主分類號: A61K39/36
• 分類號: A61K39/36;A61K49/00;A61K9/19;A61K9/08;A61K47/10;A61P37/08;A61P11/06;A61P11/02;A61P17/00
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

1.一組豚草花粉變應原蛋白Amb?t?1.04’、Amb?t?1.05’、Amb?t8’、Amb?t?10、Amb?t?11和Amb?t?12用于在制備診斷變態反應疾病并對其進行特異性免疫治療的制劑中的應用，其特征在于，所述Amb?t1.04’如SEQ?ID?NO.4所示的氨基酸序列，所述Amb?t?1.05’如SEQ?IDNO.5所示的氨基酸序列，所述Amb?t?8’如SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列，所述Amb?t?10如SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列，所述Amb?t?11如SEQ?ID?NO.8所示的氨基酸序列，所述Ambt?12如SEQ?ID?NO.9所示的氨基酸序列。

2.一種權利要求1所述豚草花粉變應原蛋白Amb?t?1.04’、Amb?t?1.05’、Amb?t?8’、Ambt?10、Amb?t?11和Amb?t?12的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：

S1、采集豚草花粉，常溫干燥或真空干燥或流化床干燥；

S2、對干燥后的花粉脫脂、干燥；

S3、將脫脂干燥后的豚草花粉按重量g體積ml比1:50～1:10加入pH為7.9～8.2磷酸鹽—鹽水緩沖液，2-8℃攪拌22～26h進行浸提；

S4、取步驟S3后的浸提液，離心取上清液；將上清液過濾及除菌過濾；

S5、將過濾后的上清液進行超濾濃縮，獲得超濾濃縮液；

S6、將所述超濾濃縮液經過二次過濾和除菌過濾后，真空凍干獲得豚草花粉變應原凍干品；

S7、將所述豚草花粉變應原凍干品用pH?6.5～7.5磷酸鹽—鹽水緩沖液復溶配置為豚草花粉變應原原液，2～8℃放置，與等體積滅菌的甘油混勻，調節溶液pH值至6.0～8.0；

所述磷酸鹽—鹽水緩沖液包括4.5～5.5g/L的氯化鈉，0.03％～0.05％的磷酸二氫鉀，1.5％～2％十二水合磷酸氫二鈉，0.2％～0.4％的苯酚，調pH為7.9～8.2。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，在步驟S2中，所述花粉脫脂采用花粉與丙酮以1：5～1:1的重量g體積ml比進行脫脂處理，重復脫脂至上層液體澄清；

在步驟S4中，所述離心的條件為8000～12000g，離心溫度2～8℃，時間為15～20分鐘；所述過濾及除菌過濾為先用4000目濾布過濾后，再通過紙板過濾、0.45μm和0.22μm濾膜依次過濾。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述超濾濃縮用3KD超濾膜超濾，當超濾透過液總蛋白含量≤0.02mg/ml，停止超濾；當超濾透過液總蛋白含量0.02mg/ml，更換超濾膜之后對超濾透過液重復超濾，直至超濾透過液總蛋白含量≤0.02mg/ml為止；

在步驟S6中，所述真空凍干的條件為-50～-35℃凍結，2～8mbar真空壓力下，-25℃干燥，控制水分含量≤3％。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S1還包括對原料豚草花粉進行鏡檢鑒別和/或DNA鑒定的步驟，其中DNA鑒定方法為，以SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2為引物，對鑒別豚草原料進行PCR擴增，并檢測擴增產物。