[發(fā)明專利]全面篩檢轉(zhuǎn)基因成分的標(biāo)志物組、組合物及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910204523.0
• 申請日: 2019-03-18
• 公開（公告）號: CN110004244A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 付偉;王晨光;朱鵬宇;朱水芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京君慧知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11716
• 代理人: 王振南

本申請公開了一種全面篩檢轉(zhuǎn)基因成分的標(biāo)志物組、組合物及應(yīng)用。所述標(biāo)志物組包括：7種篩選元件：PCAMV35S、TCAMV35S、TNOS、PRbcS4、TPINII、TE9、PAT，還包括玉米DAS40278、大豆DP305423和大豆CV127的品系特異性序列。所述組合物為檢測所述標(biāo)志物組的試劑，優(yōu)選為SEQ ID No.1—33所示引物和探針。本發(fā)明可覆蓋市面上66種商業(yè)化的轉(zhuǎn)基因品系，具有重復(fù)性好、高通量、靈敏、準(zhǔn)確和快速的優(yōu)點(diǎn)，在轉(zhuǎn)基因成分檢測方面具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體說是一種全面篩檢轉(zhuǎn)基因成分的標(biāo)志物組、組合物及應(yīng)用。

背景技術(shù)

轉(zhuǎn)基因作物已經(jīng)商業(yè)化二十余年，2016年時(shí)種植面積已達(dá)到了1.851億公頃，超過26個(gè)國家種植了轉(zhuǎn)基因作物。隨著轉(zhuǎn)基因作物在全球范圍內(nèi)的大規(guī)模種植和消費(fèi)，越來越多的國家和地區(qū)開始實(shí)施轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識管理制度。鑒于轉(zhuǎn)基因作物在種植收割、生產(chǎn)加工和運(yùn)輸消費(fèi)等過程中會出現(xiàn)不可避免的混雜，目前有60多個(gè)國家和地區(qū)對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識設(shè)置了閾值。我國相關(guān)部門也正在研究將其引入轉(zhuǎn)基因安全管理體系當(dāng)中。標(biāo)識閾值的采用，為轉(zhuǎn)基因安全管理帶來更加科學(xué)合理的技術(shù)措施，同時(shí)也對轉(zhuǎn)基因成分的精準(zhǔn)定量提出了迫切而具體的需求。

目前，轉(zhuǎn)基因成分定量檢測一般采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，是通過繪制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度曲線，通過檢測閾值來計(jì)算轉(zhuǎn)基因成分含量的，但是在實(shí)際應(yīng)用中局限性很大，最主要的是標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，首先很難做到精準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)濃度梯度，其次在操作步驟及繪制曲線過程中會不可避免地產(chǎn)生誤差，數(shù)字PCR就能很好地避免這一點(diǎn)并可以不受擴(kuò)增效率的影響，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的定量。

數(shù)字PCR(以下簡稱dPCR)是一種基于油包水結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)單分子擴(kuò)增的PCR方法，能實(shí)現(xiàn)不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測拷貝數(shù)，利用內(nèi)參基因與外源基因拷貝數(shù)比例來計(jì)算轉(zhuǎn)基因成分含量，從而實(shí)現(xiàn)高靈敏度的定量。dPCR根據(jù)樣本分散方式主要有微滴式數(shù)字PCR(ddPCR)和芯片式數(shù)字PCR(cdPCR)兩種。

目前，轉(zhuǎn)基因成分檢測大多是針對某些品種的某些基因，還沒有全面評估所有轉(zhuǎn)基因成分或轉(zhuǎn)基因品系的方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種全面篩檢轉(zhuǎn)基因成分的標(biāo)志物組、組合物及應(yīng)用。本發(fā)明可覆蓋市面上66種商業(yè)化的轉(zhuǎn)基因品系，具有重復(fù)性好、高通量、靈敏、準(zhǔn)確和快速的優(yōu)點(diǎn)，在轉(zhuǎn)基因成分檢測方面具有很好的應(yīng)用前景。

為達(dá)到以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

本發(fā)明首先提供一標(biāo)志物組，包括如下7種篩選元件：豌豆核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶小亞基E9基因終止子(TE9)、胭脂堿合成酶基因終止子(TNOS)、花椰菜花葉病毒啟動子(PCAMV35S)、綠產(chǎn)色鏈霉菌編碼膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(PAT)、馬鈴薯蛋白酶抑制劑II終止子(TPINII)、擬南芥RbcS4基因啟動子(PRbcS4)、和花椰菜花葉病毒終止子(TCAMV35S)；

任選的，所述標(biāo)志物組還包括玉米DAS40278的品系特異性序列、和/或大豆DP305423的品系特異性序列、和/或大豆CV127的品系特異性序列；

以上標(biāo)志物組可以制成標(biāo)準(zhǔn)品如質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)DNA分子片段等，用于轉(zhuǎn)基因成分檢測時(shí)作為參照如陽性標(biāo)準(zhǔn)品使用。

本發(fā)明保護(hù)以上所述標(biāo)志物組在(定量或定性)檢測轉(zhuǎn)基因成分中的應(yīng)用，

優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)基因成分來源于轉(zhuǎn)基因植物和/或其加工品(所述加工品可以提取到未發(fā)生過改變的DNA)；

所述轉(zhuǎn)基因植物包括但不限于如下植物：玉米、大豆、油菜、馬鈴薯、甜菜、苜蓿、和/或水稻；