[發明專利]一種具有免疫調節活性瓜蔞子多糖的制備方法

在審

• 申請號: 201910197443.7
• 申請日: 2019-03-15
• 公開（公告）號: CN109929048A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 周鴻立;冉麗梅;胡政宇;汪笑笑;孫新舜
• 申請（專利權）人: 吉林化工學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P37/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開一種瓜蔞子多糖最佳提取及其分離純化工藝，包括：瓜蔞子多糖的最優提取工藝條件為液料比10~50:1(g:ml)，提取溫度為50~90℃，提取功率為250~800W，提取時間為10~35min，在此條件下多糖最佳提取率為0.94%~2.49%。采用酶Sevage法對瓜蔞子多糖提取液進行脫蛋白處理，DEAE?52纖維素層析柱純化分離。此法制備的5個瓜蔞子多糖由Man、Rib、Rha、GluA、GalA、Glu、Gal、Xyl、Arab和Fuc等單糖不同種類不同比例組成，其瓜蔞子單體多糖的分子量范圍為364~3235616 Da，STKMP?4和STKMP?5具備免疫調節活性。

技術領域

本發明涉及一種瓜蔞子多糖最佳提取工藝及其分離純化工藝和免疫活性。

背景技術

瓜蔞子，又被稱作瓜蔞仁、栝樓仁、栝樓子等，是成熟的葫蘆類栝樓或雙邊栝樓的已干燥的種子，主要具有溫潤肺部、止咳化痰、滋潤腸道、治療便秘等，入藥常用來治療咳嗽痰多、腸道燥熱便秘，也被人叫做“全瓜蔞”，還具有改善心腦血管疾病、化痰、消炎等作用。《雷公炮炙論》最早記載：“皮、子、莖、根, 其效各別。”但其具體效用未記載。《名醫別錄》分別記載了其功效: “栝樓根, 無毒。主除腸胃中痼熱, 八疸, 身面黃, 唇干舌燥, 短氣,通脈, 止小便利。實, 治胸痹,悅澤人面。莖葉, 治中熱傷暑。”古代方劑中的栝樓有時指根，有時指果，所載栝樓桂枝湯中的栝樓指根，而該書中的栝樓薤白白酒湯及栝樓薤白半夏湯中的栝樓指果實。瓜蔞子甘寒清潤, 化痰瀉熱, 為治熱痰燥痰之要藥。用于熱痰內結,咳嗽喘急, 痰黃稠黏。與半夏為伍, 如《濟生方》中治肺熱痰咳、胸膈塞滿的半夏丸。《丹溪心法》中治酒痰咳嗽。由于其質潤多脂, 滑腸通便, 還可用于腸燥便秘, 古方單用或與火麻仁、郁李仁同用，還能化痰消腫。

瓜蔞子為化學成分主要含有精氨酸、亮氨酸、谷氨酸及天冬氨酸等17種氨基酸和鉀、鈉、鈣、鎂、銅、鋅、鐵及錳等無機元素及少量的揮發油、飽和脂肪酸等。果實中普遍含有多糖，植物多糖是一種具有多種生理功能和開發價值的活性多糖。許多植物多糖具有提高免疫力、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗感染、抗潰瘍等多種生理功能。

目前，對有關瓜蔞子多糖類成分的研究報道較少。于丹等人對瓜蔞種子的多糖類成分的總糖含量、糖醛酸含量進行研究，測得瓜蔞子多糖含量為64.85%、糖醛酸含量為25.05%，是一種酸性雜多糖。熊利芝等人采用超聲輔助響應面法提取栝樓皮多糖，得到最優工藝為提取時間60.26 min，超聲功率為204.39 W，液料比20:1( ml/g) ，提取溫度為72.45℃，提取率為6.06%，超聲功率、提取溫度對栝樓皮多糖的提取率影響達到極顯著水平。劉敦華等將沙蒿籽膠多糖經0.5mol/L KOH (含20mmol/L 的NaBH₄) 處理分級，得到2個級分AG1和AG2。A G1 經DEAE Sepharose CL-6B柱層析分級，得到AG11和AG12共2個組分。

張岫秀等人采用臟器指數評價、巨噬細胞吞噬能力測定和淋巴細胞增殖能力3 種方法考察瓜蔞多糖對免疫抑制小鼠免疫能力的影響，發現其能顯著提高免疫抑制小鼠巨噬細胞的吞噬能力，表明瓜蔞多糖對小鼠的非特異性免疫功能具有促進作用。瓜蔞多糖具有良好的免疫增強活性，但其免疫調節機制尚不清楚。

多糖結構極其復雜，不能用小分子化合物的方法來評價。本專利研究瓜蔞子多糖，旨在為瓜蔞的實際應用提供理論基礎。

發明內容

本專利采用微波提取法提取瓜蔞子多糖，通過響應面實驗設計優化提取工藝，以期提高瓜蔞子多糖的提取率，進行多糖的單糖組成、分子量和免疫調節活性的測定，為進一步開發瓜蔞資源奠定理論基礎。

一種如權利要求1所述采用響應面優化微波輔助具有免疫活性的瓜蔞子多糖及其純化分離工藝，其特征在于按如下步驟進行：