[發明專利]復合瓊脂糖微球及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910196474.0
• 申請日: 2019-03-15
• 公開（公告）號: CN109999008B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 劉劍波;李海豐;何曉曉;王柯敏;劉松楊
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: A61K9/50
• 分類號: A61K9/50;A61K47/26;A61K38/54;A61P7/02;A61P9/12;B01J13/02;A61K31/155
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 陳暉

本發明公開了一種復合瓊脂糖微球及其制備方法和應用，復合瓊脂糖微球包括酶A、酶B、一氧化氮前體衍生物和瓊脂糖，酶A、酶B和一氧化氮前體衍生物包裹在瓊脂糖中形成復合瓊脂糖微球，酶A為葡萄糖氧化酶或類葡萄糖氧化酶、所述酶B為過氧化物酶或類過氧化物酶。其制備方法為將酶A和酶B加入瓊脂糖溶液中形成水相；將水相滴加至有機相中，攪拌離心，收集離心產物；在離心產物中加入一氧化氮前體衍生物進行孵育得到復合瓊脂糖微球。本發明的復合瓊脂糖微球能以內源性葡萄糖為反應底物刺激凝膠復合微球可控催化產生一氧化氮，藥物作用時間長，生物安全性好。其制備方法操作簡單，便于推廣和應用。該復合瓊脂糖微球可應用于制備預防和治療心血管疾病的藥物。

技術領域

本發明涉及材料技術領域，特別涉及復合瓊脂糖微球及其制備方法和應用。

背景技術

一氧化氮(nitric oxide，NO) 是一種新型生物信息分子，具有擴張血管、調節血壓、抑制血小板粘附等作用，參與機體保護、調節及逆轉等機制，特別是調節心血管系統中眾多的生理和病理生理過程。將兩種酶和凝膠體系雜合構建包被級聯酶的凝膠微球可以充分發揮二者的優勢產生一氧化氮，有望應用于生物醫藥、分析催化等領域。

目前，補充供給一氧化氮、提高血液一氧化氮濃度是血栓、高血壓等心血管疾病預防和治療的一種重要措施。一氧化氮的供給主要依賴于一氧化氮供體化合物的補充或者血管內皮細胞的一氧化氮合酶轉基因表達。一氧化氮供體藥物存在藥物作用時間過短、生物穩定性差、人體毒副作用大、缺乏靶向性和組織特異性等不足。一氧化氮合酶轉基因技術存在表達量難以控制、存在表達滯后的藥物見效慢等缺點。一氧化氮補充供給的研究主要集中在一氧化氮供體化合物的開發以及血管內皮細胞的一氧化氮合酶的轉基因表達。然而，采用葡萄糖氧化酶與過氧化物酶級聯酶構建仿生催化體系應用于一氧化氮的生成研究還十分少見。

瓊脂糖（Agarose）由β-D-吡喃半乳糖(1-4)連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基單位構成，是具有多孔結構、生物相容性好的凝膠體系，廣泛應用于親和層析和免疫分析。酶是一類極為重要的生物催化劑（biocatalyst）。由于酶的作用，生物體內的化學反應在極為溫和的條件下也能高效和特異地進行。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：一氧化氮供體藥物存在藥物作用時間過短、生物穩定性差、人體毒副作用大、缺乏靶向性和組織特異性等不足。為了克服現有技術的不足，本發明提供一種復合瓊脂糖微球，能以內源性葡萄糖為反應底物刺激凝膠復合微球可控催化產生一氧化氮，藥物作用時間長，生物安全性好。其制備方法操作簡單，便于推廣和應用。該復合瓊脂糖微球可應用于制備預防和治療心血管疾病的藥物。

本發明是通過以下手段解決上述技術問題的：

一種復合瓊脂糖微球，所述復合瓊脂糖微球包括酶A、酶B、一氧化氮前體衍生物和瓊脂糖，所述酶A、酶B和一氧化氮前體衍生物包裹在所述瓊脂糖中形成復合瓊脂糖微球，所述酶A為葡萄糖氧化酶或類葡萄糖氧化酶、所述酶B為過氧化物酶或類過氧化物酶。

上述的復合瓊脂糖微球，優選的，所述葡萄糖氧化酶為β-D-葡萄糖氧化還原酶；所述類葡萄糖氧化酶為鈀納米顆粒或金納米顆粒。

上述的復合瓊脂糖微球，優選的，所述過氧化物酶為辣根過氧化物酶；所述類過氧化物酶為四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵納米顆粒、普魯士藍納米顆粒、富勒烯納米顆粒、二氧化錳納米顆粒和血晶素結合的G-四聚體中的一種。

上述的復合瓊脂糖微球，優選的，所述一氧化氮前體衍生物為羥基脲、左旋精氨酸或N-羥基左旋精氨酸。

在一個總的技術構思中，本發明還提供了一種上述的復合瓊脂糖微球的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

S1、將酶A和酶B加入瓊脂糖溶液中形成水相；

S2、將水相滴加至有機相中，攪拌離心，收集離心產物；