[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)錄測序技術(shù)在篩選棗縮果病抗病基因中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910189047.X
• 申請日: 2019-03-13
• 公開（公告）號: CN109929923A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋曉斌;焦小利;黃建;楊卉心
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發(fā)明公開了一種轉(zhuǎn)錄測序技術(shù)在篩選棗縮果病抗病基因中的應(yīng)用，涉及生物基因技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的棗縮果病由細交鏈孢菌浸染引起。棗的品種為抗縮果病的蜂蜜罐和感縮果病的七月鮮。轉(zhuǎn)錄測序技術(shù)包括預(yù)處理、轉(zhuǎn)錄組測序及數(shù)據(jù)處理。預(yù)處理包括：提取棗總RNA、檢測總RNA質(zhì)量、合成cDNA文庫及實時熒光定量PCR驗證。本發(fā)明以棗抗縮果病‘蜂蜜罐’、感縮果病‘七月鮮’及其清水處理對照材料，以細交鏈孢菌(A.altrenata)為誘導(dǎo)條件，通過利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)及qPCR等技術(shù)從分子水平研究棗果實在細交鏈孢菌(A.altrenata)誘導(dǎo)下的應(yīng)答機制，以便篩選棗縮果病抗病基因，為棗育種工作提供一定的理論基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物基因技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種轉(zhuǎn)錄測序技術(shù)在篩選棗縮果病抗病基因中 的應(yīng)用。

背景技術(shù)

棗(Ziziphus jujuba Mill.)是鼠李科(Rhamnaceae)棗屬植物，是我國重要的干果樹種， 棗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展在給農(nóng)民帶來高水平經(jīng)濟收入和促進生態(tài)環(huán)境的良好改變具有十分積極的作 用(劉孟軍，2009)種。棗樹以其特產(chǎn)于我國、抗旱耐脊且棗果速豐、營養(yǎng)豐富尤其是維生素 含量高、入藥還可潤心肺、益氣養(yǎng)容等用途廣泛的優(yōu)點，在促進農(nóng)民經(jīng)濟發(fā)展和改善生態(tài)環(huán) 境方面居十分重要的地位。

棗產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展在促進農(nóng)民經(jīng)濟發(fā)展和改善生態(tài)環(huán)境方面具有重大作用，但由于棗縮 果病的發(fā)生后，造成棗果脫落及壞死，嚴重影響了棗果的產(chǎn)量和品質(zhì)，對我國棗區(qū)的生產(chǎn)造 成嚴重的危害，對該病害的防治刻不容緩。20世紀70年代，國內(nèi)開始有棗縮果病研究的 報道(韓金聲1979)，而目前對于棗縮果病病原菌的鑒定始終沒有統(tǒng)一定論。初期認為此病 害為生理性病害，也有認為是一種歐文氏菌屬細菌引起的病害(陳貽金等1989)。目前為 止，共報道過的病原菌有6種真菌和2種細菌(張朝紅等2008)。曲儉緒等(1992)報道棗縮果病的病原菌為D.gregaria。鄭曉蓮等(1995)的鑒定認為病原是盾殼霉菌Coniaothyrium olivaceum Bon、細鏈隔孢菌Alternaria tenuis Nees.及群(聚)生小穴殼菌Dothriorella gregaria Sacc 3種弱寄生菌和1種細菌，而這4種病原單獨或混合接種都可產(chǎn)生典型的癥 狀；康紹蘭等(1998)提出棗縮果病由細交鏈孢菌A.altrenata、毀滅莖點霉菌P.destructive、 梭殼孢菌Fusicoccum sp三種病原真菌單獨或混合侵染引起；羅軍等(2009)通過定期采集 棗樹并進行組織分離，明確了棗縮果病病原包含有細交鏈孢菌A.altrenata、梭殼孢菌 Fusicoccum sp、細極鏈格孢(A.altrenata)、和橄欖色盾殼霉Coniaothyrium olivaceum；韓黨悅 (2012)利用組織分離、形態(tài)觀察和分子鑒定等方法確定了分離比率較穩(wěn)定的棗縮果病病原 菌細交鏈孢菌A.alternata；王葉等(2013)明確了6株棗縮果病病原菌，即七葉樹殼梭抱菌 Fusicoccum aesculi Cord、頭狀莖點霉Phomaglomerata、細極鏈格孢菌Alternaria tenuissima(Kunze)Wiltshire、細交鏈孢菌A.alternata、鴨梨鏈格孢A.R.G.Roberts。雖然各地 區(qū)對棗縮果病病原的報道各不相同，但廣泛認為棗縮果病是由以上單一病原或兩種以上病原 混合侵染而引起，并發(fā)現(xiàn)鏈格孢屬的菌株可能是引起棗縮果病最普遍的病原真菌。

為了控制上述病菌，相關(guān)研究主要從生理生化和形態(tài)結(jié)構(gòu)水平探討棗對細交鏈孢菌的防 御作用，而分子水平的研究鮮有報道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明實施例提供了一種轉(zhuǎn)錄測序技術(shù)在篩選棗縮果病抗病基因中的應(yīng)用。

為達到上述目的，本發(fā)明主要提供了如下技術(shù)方案：

一方面，本發(fā)明實施例提供了一種轉(zhuǎn)錄測序技術(shù)在篩選棗縮果病抗病基因中的應(yīng)用。

作為優(yōu)選，所述棗縮果病由細交鏈孢菌浸染引起。