[發明專利]一種適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體

有效

• 申請號: 201910187914.6
• 申請日: 2019-03-13
• 公開（公告）號: CN109913490B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 劉秀霞;高雄;孫曼曼;董貴賓;嚴豪;白仲虎;楊艷坤;劉春立
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/77
• 分類號: C12N15/77;C12P21/02
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王曉東

本發明公開了一種在谷氨酸棒桿菌表達菌株Corynebacterium?glutamicum?CGMCC1.15647的增強型表達載體，用于外源蛋白表達。其特征在于：將內源雙順反子元件引入到穿梭載體pXMJ19的多克隆位點之前，得到含有增強型Ptac啟動子的谷氨酸棒桿菌表達載體pGX19，該載體能夠顯著提高外源蛋白GFP、SUMO?NT?proBNP、VHH的表達能力。

技術領域

本發明屬于基因工程和生物技術領域，具體涉及一種適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體。

背景技術

谷氨酸棒桿菌(Corynebacterium?glutamicum)是一種兼性厭氧的革蘭氏陽性工業微生物，廣泛用于一些有機酸的合成^[1]。因具有無內毒素、抗逆性強、蛋白酶水平較低等優勢，近年來谷氨酸棒桿菌也正逐漸被開發用于外源重組蛋白的表達^[2]。

目前能夠用于谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達的載體較少，常用的有pXMJ19、pEC-XK99E等載體，這些載體大部分仍是基于經典的大腸桿菌Ptac或者Ptrc啟動子來表達外源蛋白。盡管近年來也有一些內源啟動子以及合成啟動子的篩選及應用研究，但總體來看強度高于Ptac啟動子的很少，并且基本也都是非誘導型啟動子。一些內源誘導型啟動子，如對數末期自誘導的Pcg3141以及碳代謝誘導的PmalE1和Pgit1等^[3?4]，綜合本底控制、表達強度以及誘導幅度等方面來看往往無法有效替代Ptac啟動子。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述的技術缺陷，提出了本發明。

因此，作為本發明其中一個方面，本發明克服現有技術中存在的不足，提供一種適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體，其包括，蛋白表達載體，其核苷酸序列包括源基因序列和SD序列。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述源基因序列包括谷氨酸棒桿菌NCgl2319基因編碼序列ATG下游的堿基及5'UTR序列。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述5'UTR序列長度為30bp或91bp，所述ATG下游的堿基序列長度為59bp。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述5'UTR序列如SEQ?ID?NO:1或SEQ?ID?NO:2所示，所述ATG下游的堿基序列如SEQ?ID?NO:3所示。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述5'UTR序列如SEQ?ID?NO:1，所述ATG下游的堿基序列如SEQ?ID?NO:3所示。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述源基因序列如SEQ?ID?NO:4所示。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述SD序列如SEQ?ID?NO:5所示。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：包括所述序列的互補序列。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述載體用于谷氨酸棒桿菌外源蛋白的表達。

作為本發明所述適用于谷氨酸棒桿菌的增強型表達載體的優選方案：所述載體用于谷氨酸棒桿菌SUMO-NT-proBNP、VHH和EGFP增強綠色熒光蛋白的表達。