[發明專利]一種檢測基因表達量的整體解決試劑盒及其在臨床樣本檢測、細胞研究檢測中的應用

在審

• 申請號: 201910187712.1
• 申請日: 2019-03-13
• 公開（公告）號: CN109825556A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 劉宗梁;李燕華;曹齊樹
• 申請（專利權）人: 合肥知恩生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 合肥天明專利事務所(普通合伙) 34115
• 代理人: 趙瑜;金凱

本發明涉及一種科研及臨床醫學用細胞內信號轉導與調控級連反應通路基因檢測試劑盒，即本發明是一種檢測基因表達量的整體解決試劑盒，所述述試劑盒內包含有根據該特定基因序列設計的多條特異性檢測引物F/R，該試劑盒可應用于臨床樣本檢測、細胞研究檢測。本發明整體解決試劑盒由于含有針對各個特定靶基因群的PCR上下游引物以及第一鏈cDNA合成、Real Time PCR等過程所有需要的酶、抑制劑、buffer、Mg²⁺、dNTP、逆轉錄引物等組分，經過優化的反應體系及反應條件，從而可以通過一步法檢測基因表達量。該方法具有操作簡便、高特異性及高靈敏度的特點，特別適合科研及臨床醫學大量樣本檢測。

技術領域

本發明涉及一種科研及臨床醫學用細胞內信號轉導與調控級連反應通路基因檢測試劑盒，即本發明是一種檢測基因表達量的整體解決試劑盒及其在臨床樣本檢測、細胞研究檢測中的應用。

背景技術

信號通路(Signal Pathway)是指能將細胞外的分子信號經細胞膜傳入細胞內發揮效應的一系列酶促反應通路。這些細胞外的分子信號(稱為配體，ligand)包括激素、生長因子、細胞因子、神經遞質以及其它小分子化合物等。

在生物體中，細胞內各種不同的生理及生化反應途徑都是由一系列不同的蛋白組成的，執行著不同的生理生化功能。各信號通路中上游蛋白對下游蛋白活性的調節(包括激活或抑制作用)主要是通過添加或去除磷酸基團，從而改變下游蛋白的立體構象完成的。信號通路的主要成員是蛋白激酶和磷酸酶，它們能夠迅速改變和恢復下游蛋白的構象。

從細胞受體接收外界信號到最后做出綜合性應答，不僅是一個信號轉導過程，更重要的是將外界信號進行逐步放大的級聯反應過程。通過信號通路的調節產生一系列綜合性的細胞應答，包括下游基因表達的調節、細胞內酶活性的變化、細胞骨架構型和DNA合成的改變等。

信號通路廣泛應用于疾病發生發展，藥物治療機制研究，腫瘤早期篩查、治療及預后評估等方面。在現代生物醫藥發展過程中，信號通路在細胞凋亡、代謝、自噬、免疫與炎癥及表觀遺傳學中發揮著重要的研究指導方向。

對細胞信號通路中相關目標分子檢測的方法分為兩大類，即蛋白質水平和核酸水平的檢測。針對蛋白質水平檢測的主要方法有蛋白質組學、免疫組化、western blot(WB)等，其中WB法為最常用方法，但該方法需要針對每一個靶分子單獨購買特定抗體，抗體成本高，且檢測靈敏度及分辨率較低，最重要的是很多抗體沒有成品銷售，這就限制了該方法的使用范圍。蛋白質組學靈敏度高，分辨率強，但組學檢測及分析周期長，檢測成本極高，這就限制了該方法在科研及臨床高通量樣本的檢測中的應用。

分子水平的檢測主要為針對信號通路相關靶基因mRNA轉錄水平的檢測，其中RealTime PCR是最常用的檢測方法。本產品試劑盒采用SYBR Green I熒光染料法對信號通路上靶基因的mRNA轉錄水平進行檢測，PCR完成后數據采用2-^△△ct法進行計算。該方法具有操作簡便，高特異性及高靈敏度，特別適合科研及臨床醫學大量樣本檢測。

信號通路網絡繁雜交錯，涉及到的靶分子豐富多樣，但目前市面上尚未出現任何一款專門用于針對細胞信號通路基因檢測的一步法試劑盒，因此本發明旨在創造一款簡單實用的信號通路一步法基因檢測試劑盒，該試劑盒包含有第一鏈cDNA合成，Real Time PCR等過程所有需要的酶、抑制劑、buffer、Mg²⁺、dNTP、逆轉錄引物等組分，最重要的是該產品提供了特別設計的針對各個靶基因檢測的PCR上下游引物和經過優化的反應體系及反應條件。

發明內容

本發明的目的是解決上述現有技術的不足，提供一種檢測基因表達量的整體解決試劑盒及其在臨床樣本檢測、細胞研究檢測中的應用。

本發明是通過以下技術方案實現的：