[發明專利]一種離心篩選具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其應用

有效

• 申請號: 201910186710.0
• 申請日: 2019-03-13
• 公開（公告）號: CN111690587B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發明（設計）人: 鮑杰;趙瞭;侯偉亮;胡明珊;張建
• 申請（專利權）人: 上海凱賽生物技術股份有限公司;山西合成生物研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/22
• 分類號: C12N1/22;C12N1/16;C12R1/645
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬

本發明公開了一種離心篩選具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其應用，屬于生物技術和微生物技術領域。具體步驟為將油脂酵母菌株培養在木質纖維素水解液中，通過離心發酵液獲取上層包含高油脂含量的輕油脂細胞轉接后繼續培養，并逐步提高離心力直到菌株發酵性能達到穩定。篩選得到新菌株命名為皮狀絲孢酵母MS28,其保藏編號為CGMCC No.14780。本發明快速高效，對所有油脂酵母菌株篩選均具有重要借鑒意義。

【技術領域】

本發明涉及生物技術和微生物技術領域，一種離心篩選具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其應用。

【背景技術】

油脂是生產高能量密度生物燃料比如生物柴油或者航空燃料的重要前提物質。來自于大豆油菜籽，向日葵或者棕櫚的植物油是進行生物柴油和航空燃料生產的主要來源。然而，極大的生物柴油市場需求需要穩定快速的底物供應。可再生的木質纖維素是非常適宜的原料來源進行發酵法生產生物柴油。

發酵菌株是影響油脂生產的關鍵因素，其應該具有高木質纖維素來源抑制物的耐受性，多種碳源利用行為和高油脂富集能力。因此，菌株選育尤為重要。油脂酵母菌株選育方法主要包括淺藍菌素染色篩選，直接油脂測重篩選，微型生物反應器篩選和漂浮細胞篩選。而人工智能輔助的高通量篩選盡管增加了篩選效率但仍遠低于細胞數，通常僅有1％的細胞得到篩選，而且后續的稱重油脂測定極大延遲了整個篩選速率。

本發明提出了一種基于離心過程中細胞密度差異性分布的原理簡單快速篩選含油率高的輕油脂細胞菌株。此方法的應用不僅可以簡化常規篩選的繁瑣過程也可以極大提升高產油脂細胞的篩選效率。

【發明內容】

本發明的目的在于提供一種離心篩選具有高含油率油脂酵母菌株的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種離心篩選具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其應用，其具體步驟為：

(1)將親本菌株以10％接種量接種于50ml 15％玉米秸稈水解液中，在30℃和180rpm條件下培養72h，其添加營養鹽組分包括1.0 g/L KH₂PO₄,0.5g/L酵母提取物,0.5g/LMgSO₄ 7H₂O,0.22g/L (NH₄)₂SO₄；

(2)取25ml發酵液在一定離心力下離心2min，并吸取5ml 發酵液最上層清液轉至新鮮水解液中在相同條件下進行培養；

(3)隨著轉接的進行逐漸增加離心力，直到菌株發酵性能達到穩定。

本發明人利用離心條件下細胞密度分布差異的原理實現了具有高含油率的輕細胞篩選。這種簡單高效方法的應用不僅極大提高了油脂酵母菌株篩選的效率也降低篩選操作的難度。

【附圖說明】

圖1離心篩選過程曲線；

圖2親本菌株和篩選菌株在15％水解液中搖瓶發酵比較；

圖3親本菌株和篩選菌株在20％水解液中3L罐發酵比較；

圖4親本菌株和篩選菌株在30％固含量同步糖化共發酵中5L 罐發酵比較。

【具體實施方式】

以下提供本發明一種離心篩選具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其應用的具體實施方式。

實施例1菌株篩選