[發明專利]一種人源化抗PSMA單鏈抗體及其應用

有效

• 申請號: 201910185298.0
• 申請日: 2019-03-12
• 公開（公告）號: CN110407939B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 方芳;王立國;蔡建輝;李強;朱文赫;王艷春;于航;張鐸
• 申請（專利權）人: 廣東醫科大學附屬第二醫院
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;G01N33/574;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 吉林省中玖專利代理有限公司 22219
• 代理人: 姜姍姍

本發明涉及一種人源化抗PSMA單鏈抗體，包括由linker連接的重鏈和輕鏈，編碼重鏈的核苷酸序列為：SEQ?ID?NO.1，編碼輕鏈的核苷酸序列為：SEQ?ID?NO.2。為前列腺癌診斷、治療和預后判斷提供有效的抗體制劑。本發明與現有技術的PSMA鼠源單克隆抗體相比來源不同，避免了異源抗體用于人體的毒副作用。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種人源化抗前列腺癌特異性膜抗原(prostate?specific?membrane?antigen,PSMA)的單鏈抗體及其在前列腺癌的治療和診斷中應用。

背景技術

單鏈抗體是一種新型的基因工程抗體，由抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區通過一段短肽連接而成，其優點在于：(1)單鏈抗體的大小只有完整抗體的1/6，但是卻完全保持了與抗原特異性結合的能力；(2)單鏈抗體的分子量小，其免疫原性更低，半衰期更短，更易于穿透腫瘤組織到達靴部位；(3)由于單鏈抗體缺少完整抗體的Fc段，因此其不易于含有Fc受體的靶細胞結合，從而提高了利用率；(4)易于基因操作和基因工程大量生產，故單鏈抗體在惡性腫瘤治療和診斷中應用越來越受到重視。

單克隆抗體一般為鼠源性，鼠源性的單克隆抗體應用于人體治療中存在諸多問題：(1)不能有效地激活人體的補體和Fc受體相關的效應系統；(2)被人體免疫系統所識別產生人抗鼠抗體；(3)在人體循環系統中被很快清除掉；(4)完整的抗體分子，即Ig的相對分子量過大，難以穿透實體瘤組織，達不到有效的治療濃度。以上原因導致使其介導的靶向治療尚存在一些困難。因此，人源化單鏈抗體的研究是目前抗體研究的熱點之一。人們利用基因工程技術制備的全人抗體能夠克服鼠源性抗體帶來的不便。

我國前列腺癌(prostate?cancer,PCa)發病人數逐年增加，且以中晚期為主。雄激素阻斷療法(androgen?deprivation?therapy,ADT)是中晚期PCa主要治療手段。然而，絕大多數患者在接受ADT治療2～3年內由雄激素依賴性前列腺癌(androgen-dependentprostate?cancer,ADPC)轉化為生存期短、易轉移和侵襲的去勢抵抗性前列腺癌(castration-resistant?prostate?cancer,CRPC)。目前國際上對CRPC還缺少有效的治療手段。PSMA在前列腺腫瘤上皮細胞尤其是CRPC及其轉移灶中有最高的表達，明顯高于正常前列腺上皮細胞內的表達，但在前列腺外的正常組織中不表達。目前PSMA單克隆抗體已經開始用于PCa靶向治療的研究。但是其鼠源性使其介導的靶向治療尚存在一些困難。

發明內容

本發明的目的是提供一種人源化抗PSMA單鏈抗體，解決了在治療前列腺癌癥的過程中動物源性抗體容易引起免疫損傷的問題，為前列腺癌靶向診斷及治療奠定基礎。

本發明是通過如下技術方案實現：

一種人源化抗PSMA單鏈抗體，由linker連接的重鏈可變區和輕鏈可變區組成，其特征在于：編碼重鏈可變區的核苷酸序列為：SEQ?ID?NO.1，編碼輕鏈可變區的核苷酸序列為：SEQ?ID?NO.2。

所述的人源化抗PSMA單鏈抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為：SEQ?ID?NO.3，輕鏈可變區的氨基酸序列為：SEQ?ID?NO.4。

本發明的目的是提供一種人源化抗PSMA單鏈抗體的基因SEQ?ID?NO.5及氨基酸序列SEQ?ID?NO.6，制備PSMA單鏈抗體，為前列腺癌診斷、治療和預后判斷提供有效的抗體制劑。

本發明一種編碼人源化抗PSMA單鏈抗體通過如下方法得到：以人PSMA重組蛋白對全人源單鏈抗體噬菌體庫進行4輪富集篩選。第4輪富集后的噬菌體抗體，以PSMA重組蛋白包被96孔板，用ELISA法對噬菌體培養上清進行篩選。共篩選克隆30個，以大于陰性對照A值的2倍作為陽性標準。其中有3個克隆呈陽性，陽性率為10％。抗體可變區基因擴增后由蘇州金唯智公司測序獲取序列。