[發明專利]一種細菌快速檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201910180860.0
• 申請日: 2019-03-11
• 公開（公告）號: CN109988810A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 丁顯廷;孫嘉慧;黃佳;李玉龍;呂君蔚
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本發明公開了一種基于細菌抑制葡萄糖氧化酶催化反應的細菌快速檢測方法，涉及微生物快速檢測領域，其特征在于，所述檢測通過獲取淀粉?碘化物紙，并將其附著在基底上，在淀粉?碘化物紙上加入葡萄糖溶液和待檢測物混勻，隨后加入葡萄糖氧化酶溶液并孵育10?20min，最后根據顯色情況和顏色變化，判斷待檢測物中是否存在細菌。本發明快速便捷，效果顯著，想法新穎，成本低廉，可實現無差別廣譜細菌檢測，適合大范圍推廣和生產。

技術領域

本發明涉及微生物檢測領域，尤其涉及一種基于細菌抑制葡萄糖氧化酶催化反應的細菌快速檢測方法及其應用。

背景技術

對個人，食品工業，醫院診斷和社會來說，細菌污染是日益嚴重的全球公共衛生威脅。據世界衛生組織稱，由于霍亂，感染性腹瀉和敗血癥等細菌相關疾病，每年約有170萬人死亡。細菌污染不僅是發展中國家的主要問題，也是發達國家的主要問題。受細菌影響的大多數人是嬰兒，兒童，免疫功能低下者和老年人，特別是在醫療條件不發達的偏遠地區。大多數細菌感染性疾病是由大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，單核細胞增生李斯特氏菌，鼠傷寒沙門氏菌，肺結核，鏈球菌，雞白痢沙門氏菌和蠟狀芽孢桿菌引起的。特別是對于大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，它們是兩種最常見的傳染性細菌，可引起嚴重的疾病，包括腹瀉，貧血，尿路感染，皮膚和軟組織感染，眼眶蜂窩織炎，壞死性筋膜炎和腎衰竭。

雖然抗生素可用于治療大多數細菌感染，但它們不斷加速抗藥性細菌的出現和傳播。如今，許多抗生素都無效，但新抗生素的發現速度已大幅下降?？紤]到新抗生素發展的緩慢，開發快速，準確，方便，早期篩選和低成本的細菌檢測方法是臨床，食品和環境質量控制領域的迫切需要。

全世界已經開始對檢測和定量細菌進行了各種努力，包括平板培養，聚合酶鏈反應(PCR)，酶聯免疫吸附測定(ELISA)和基于化學傳感器的檢測策略等，前幾種方法都有其優點，但它們都是基于實驗室的并且不能在現場進行測試，這限制了它們在日常生活實踐中用于細菌分析的效用。改進需求導致化學傳感器的發展，包括比色檢測、熒光檢測、電化學檢測等，尤其是基于比色的檢測方法由于其易于操作和視覺檢測而受到越來越多的關注。其中，由于納米技術的發展，納米材料因其獨特的物理化學性質而被廣泛用于比色細菌檢測，但依然存在缺陷。

受比色法的優點的啟發，我們開發了一種基于細菌抑制葡萄糖氧化酶催化反應(BIGR，以下簡稱BIGR)的簡單而新穎的比色測定法，用于快速檢測活細菌?；贐IGR的方法可以在紙基材上進行。我們的研究利用細菌中的葡萄糖代謝并實現了廣譜細菌檢測，總分析時間在20分鐘內，每個微區僅需要少于10微升的樣品和試劑。小鼠腹水中細菌的成功檢測也表明，該方法具有在臨床診斷中快速視覺檢測病原體的潛力，為檢測和定量細菌的創新和突破提供了一個新的思路。

發明內容

有鑒于現有技術的上述缺陷，本發明提供了一種方便快捷的細菌快速檢測方法及其應用。

為實現上述目的，本發明提供一種基于細菌抑制葡萄糖氧化酶催化反應的細菌快速檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：

步驟1：獲取淀粉-碘化物紙，并附著在基底上；

步驟2：向淀粉-碘化物紙上加入葡萄糖溶液和待檢測物，混勻；

步驟3：加入葡萄糖氧化酶(GOX)溶液并孵育，混勻，孵育1-60min；

步驟4：根據顯色情況和顏色變化，判斷待檢測物中是否存在細菌。

進一步地，所述步驟1中的基底可以是但不限于紙片、玻片、金屬片，所述基底的面積大于淀粉-碘化物紙的面積?；锥嘤嗝娣e可以用作手持。

進一步地，所述步驟1中的淀粉-碘化物紙通過打孔機獲得，形狀可以是但不限于圓形、方形、菱形或六邊形。優選的，所述淀粉-碘化物紙為圓形，直徑0.6cm，基底尺寸為1cm×1.5cm。