[發(fā)明專利]一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910180376.8
• 申請日: 2019-03-11
• 公開（公告）號: CN109730008B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于瑞海;李琪;李海昆;劉洋;王永旺
• 申請（專利權(quán)）人: 中國海洋大學(xué)
• 主分類號: A01K61/54
• 分類號: A01K61/54
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 劉艷青

1.一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

（1）挑選長牡蠣四倍體和葡萄牙牡蠣二倍體親貝，進行室內(nèi)同步促熟培育；

（2）檢取葡萄牙牡蠣二倍體親貝雌性個體取卵，以及長牡蠣四倍體親貝雄性個體取精；

（3）將上述提取的葡萄牙牡蠣二倍體卵子與長牡蠣四倍體精子雜交得到葡萄牙牡蠣雜交三倍體受精卵；

（4）將上述（3）得到的受精卵經(jīng)孵化、選優(yōu)、幼蟲培育、采苗，養(yǎng)成葡萄牙牡蠣雜交三倍體；

（5）將上述葡萄牙牡蠣雜交三倍體進行促熟培育，檢取雜交葡萄牙牡蠣三倍體的卵子與葡萄牙牡蠣二倍體精子進行受精，得到受精卵；

（6）在上述（5）得到的受精卵培育出成體葡萄牙牡蠣四倍體群體，再經(jīng)流式細胞儀檢測出葡萄牙牡蠣四倍體個體，具體為：將上述（5）得到的受精卵30-50%出現(xiàn)第一極體時,采用氯化鎂、氯化鉀和硫酸鎂混合液，麻醉處理受精卵，然后置于過濾海水中孵化、選優(yōu)，幼蟲培育、采苗、養(yǎng)殖,培育出成體葡萄牙牡蠣四倍體群體，再經(jīng)流式細胞儀檢測出葡萄牙牡蠣四倍體個體；所述氯化鎂、氯化鉀和硫酸鎂混合液的比例為2：2:1；

（7）將上述（6）中檢出的葡萄牙牡蠣四倍體個體進行分子標記和測序,分離出純正的葡萄牙牡蠣四倍體，再進行養(yǎng)成，最后進行一對一單對受精自繁，培育得到性狀穩(wěn)定的葡萄牙牡蠣四倍體。

2.如權(quán)利要求1所述的一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法，其特征在于，上述（1）中所述葡萄牙牡蠣親貝是經(jīng)過分子標記鑒定的純葡萄牙牡蠣，大小為7-10cm；所述長牡蠣四倍體是經(jīng)過流式細胞儀測定的四倍體親貝，大小為6-8 cm。

3.如權(quán)利要求1所述的一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法，其特征在于，上述（3）中葡萄牙牡蠣雜交三倍體受精卵是解剖取葡萄牙牡蠣二倍體的卵子與長牡蠣四倍體精子受精產(chǎn)生100%的雜交三倍體牡蠣受精卵。

4.如權(quán)利要求1所述的一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法，其特征在于，上述（4）中，所述雜交三倍體牡蠣受精卵培育按常規(guī)牡蠣人工育苗工藝進行，在22-26℃溫度下，經(jīng)孵化、選優(yōu)，幼蟲培育、采苗、附著培育出雜交三倍體牡蠣苗，再進行海上吊繩養(yǎng)殖成雜交葡萄牙牡蠣三倍體。

5.如權(quán)利要求1所述的一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法，其特征在于，上述（5）中，所述雜交葡萄牙牡蠣三倍體的卵子在新鮮的過濾海水中熟化30-60分鐘。

6.如權(quán)利要求1所述的一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法，其特征在于，上述（6）中，所述氯化鎂、氯化鉀和硫酸鎂混合液的濃度50-65g/L麻醉處理受精卵15-25分鐘。

7.如權(quán)利要求1所述的一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法，其特征在于，將孵化出雜交葡萄牙牡蠣四倍體群苗，按常規(guī)牡蠣人工育苗操作培育成雜交葡萄牙牡蠣四倍體群附殼苗，進行海上吊繩養(yǎng)殖至成體。