[發(fā)明專利]預(yù)測腎透明細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910176747.5
• 申請日: 2019-03-08
• 公開（公告）號: CN110055326B
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王萍;任雨;王雪;孫樹本;陳一勇
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 張鴻飛

本發(fā)明公開了一種預(yù)測腎透明細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物及其應(yīng)用。一種能夠用于ccRCC轉(zhuǎn)移早期診斷的生物標(biāo)記物，該標(biāo)記物為CREB基因的甲基化產(chǎn)物。本發(fā)明上述的用于ccRCC轉(zhuǎn)移早期診斷的生物標(biāo)記物，具體通過提取ccRCC病人手術(shù)后口服sunitinib藥物血清中DNA，經(jīng)亞硫酸鹽修飾后進(jìn)行甲基化特異性PCR；將得到的CREB基因甲基化；結(jié)果和病人在治療過程中的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況相結(jié)合，進(jìn)而預(yù)測CREB基因甲基化與ccRCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和生存之間的關(guān)系。具有能夠發(fā)現(xiàn)臨床上早期腎癌患者的微轉(zhuǎn)移，進(jìn)而調(diào)整治療策略和正確評估預(yù)后的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及分子標(biāo)記在對局限性腎透明細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移早期預(yù)測技術(shù)領(lǐng)域，即一種預(yù)測腎透明細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma，RCC)起源于腎實質(zhì)泌尿小管上皮，是最常見、最致命的腎臟惡性腫瘤，發(fā)病率占全部腎臟腫瘤的90％。RCC是一種異質(zhì)性疾病，包含一系列有明顯遺傳和/或表觀遺傳差異和臨床特征差異的惡性腫瘤，主要包括腎透明細(xì)胞癌(clear cell RCC，ccRCC)、乳頭狀細(xì)胞癌和嫌色細(xì)胞細(xì)胞癌。ccRCC的發(fā)病率占腎細(xì)胞癌的90％。

目前手術(shù)切除術(shù)仍然是治療ccRCC的最主要手段，但是治療效果不佳。同時，因為不同腎細(xì)胞癌亞型有明顯遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)等差異，致使不同RCC亞型患者的預(yù)后差異較大。ccRCC具有極高的轉(zhuǎn)移率，研究發(fā)現(xiàn)30％的患者在診斷時已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，另有30-50％的患者發(fā)生術(shù)后轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。因此，尋找新的被廣泛認(rèn)可的特異性標(biāo)志物對ccRCC的轉(zhuǎn)移做早期預(yù)測，將對提高病人的生存意義重大。

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展伴隨著整個基因組基因表達(dá)的失調(diào)，其中DNA甲基化與腫瘤發(fā)生關(guān)系最為密切。一般認(rèn)為，基因的甲基化程度與基因表達(dá)成反平行關(guān)系。研究表明，原癌基因c-myc、EGF和AFP在胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)受甲基化的調(diào)節(jié)，即隨著這些基因甲基化程度降低，它們的表達(dá)逐漸升高。但在出生后，這些基因被重新甲基化，在特定的組織中表達(dá)受到限制。Ohtsuki等在對人骨髓瘤細(xì)胞的c-myc進(jìn)行了CCGG序列的甲基化狀況和基因表達(dá)的研究，在排除了因其他基因結(jié)構(gòu)異常而致該有表達(dá)的情況下，發(fā)現(xiàn)c-myc第三外顯子CCGG序列與正常人扁桃體B淋巴細(xì)胞相比顯著低甲基化，二者這種低甲基化與c-myc在骨髓瘤細(xì)胞中高表達(dá)有關(guān)。Sharrard等用c-myc基因亞片段作為探針，分別對該基因各段的CCGG位點甲基化程度進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)c-myc 5’端和第一、二外顯子的甲基化水平在正常結(jié)腸粘膜、腺瘤和腺癌都一致，而第三外顯子在腺瘤和腺癌中明顯低甲基化。深入研究發(fā)現(xiàn)，第三外顯子的低甲基化可能影響c-myc蛋白的結(jié)合并改變基因的表達(dá)。由此可見，在腫瘤組織中，癌基因的高表達(dá)伴隨其低甲基化。Maria等從人膀胱癌中分理出具有轉(zhuǎn)化活性的c-Ha-ras基因，用原核生物甲基化酶分別將該基因CCGG和CGCG位點完全甲基化后，在轉(zhuǎn)染細(xì)胞發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)化率下降80％。若再用5-雜氮胞苷處理已經(jīng)轉(zhuǎn)染、但未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，c-Ha-ras基因又重新獲得轉(zhuǎn)化能力。因此，他們認(rèn)為這種能力的獲得是由于癌基因的一些重要甲基化位點的去甲基化原因。