[發明專利]一種制備含量子點標記的抗豬病毒抗體免疫層析試紙條的方法、制備的試紙條及應用

有效

• 申請號: 201910173046.6
• 申請日: 2019-03-07
• 公開（公告）號: CN111665362B
• 公開（公告）日: 2023-10-17
• 發明（設計）人: 田克恭;王瑩;晉春霞;張許科
• 申請（專利權）人: 北京中科基因技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種制備含量子點標記的抗豬病毒抗體免疫層析試紙條的方法，其中，所述方法包括：

步驟(1)用最大吸收峰為500～700nm的量子點標記所述抗豬病毒抗體，所述量子點與所述抗豬病毒抗體摩爾比為1:1～1:150，得到所述量子點標記的抗豬病毒抗體；

步驟(2)將所述步驟(1)中的所述量子點標記的抗豬病毒抗體進行封閉，所述量子點標記抗體封閉液包含pH7.4 0.1M PBS溶液、0.1％～0.6％V/V胎牛血清、0.04％W/V蔗糖，得到封閉的量子點標記的抗豬病毒抗體；

步驟(3)將所述步驟(2)中的所述封閉的量子點標記的抗豬病毒抗體進行復溶，所述量子點標記抗體復溶液包含pH7.4的0.1M PBS、0.2％～1.0％W/V蔗糖、0.05％W/V PEG4000、0.02％V/V Proclin300，得到復溶的量子點標記的抗豬病毒抗體；

步驟(4)將所述步驟(3)中的所述復溶量子點標記的抗豬病毒抗體吸附于量子點標記墊上，所述吸附的量子點標記的抗豬病毒抗體濃度為8～140μg/ml；以及

步驟(5)將固定抗體用固定抗體稀釋液稀釋，所述固定抗體稀釋液包含pH7.4的0.1MPBS、0.5％W/V蔗糖、0.1％～1.0％W/VPEG20000，所述固定抗體稀釋至0.3～1.0mg/ml，然后固定于檢測線上，質控線上固定羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(1)中所述抗豬病毒抗體為豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體、豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體、豬圓環病毒2型單克隆抗體、豬偽狂犬病病毒單克隆抗體，所述量子點最大吸收峰為520～660nm，所述量子點與所述抗豬病毒抗體摩爾比為1:5～1:100。

3.根據權利要求2所述的方法，所述量子點最大吸收峰為520～625nm，所述量子點與所述抗豬病毒抗體摩爾比為1:5～1:80；最優選地，所述量子點最大吸收峰為525～605nm。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(1)中所述抗豬病毒抗體為豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體PEDV-McAB2，所述單克隆抗體PEDV-McAB2重鏈可變區核苷酸序列如SEQID No.1或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.2或其簡并序列所示；或為豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-3D2，所述單克隆抗體TGEV-3D2重鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.5或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.6或其簡并序列所示；或為豬圓環病毒2型單克隆抗體3G12，所述豬圓環病毒2型單克隆抗體3G12由保藏號為CCTCC No:C2014198小鼠雜交瘤細胞3G12分泌；或為豬偽狂犬病病毒單克隆抗體PRV-5G12、豬偽狂犬病病毒單克隆抗體PRV-1B9、豬偽狂犬病病毒單克隆抗體PRV-3B6中的任一種，所述豬偽狂犬病病毒單克隆抗體PRV-5G12重鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.9或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列為SEQ ID No.10或其簡并序列所示，所述豬偽狂犬病病毒單克隆抗體PRV-1B9重鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.13或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.14或其簡并序列所示，所述豬偽狂犬病病毒單克隆抗體PRV-3B6重鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.17或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ ID No.18或其簡并序列所示。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(4)中所述吸附的量子點標記的抗豬病毒抗體濃度為10～100μg/ml；所述量子點標記墊為玻璃纖維膜或聚酯膜。

6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(5)中所述固定抗體為豬流行性腹瀉病毒抗體、豬傳染性胃腸炎病毒抗體、豬圓環病毒2型抗體、豬偽狂犬病病毒抗體；所述羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗濃度為0.4～2.5mg/ml。