[發(fā)明專利]利用酶標儀微量比色法大批量快速檢測分析水中磷的方法

在審

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• 申請日: 2019-03-07
• 公開（公告）號: CN109883968A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢寶;徐劍秋;汪金成;張明波;肖瀟;王文靜;陳峰;張德兵;周裕紅;陳果;周明
• 申請（專利權(quán)）人: 長江水利委員會水文局
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/17;G01N21/78
• 代理公司: 長沙星耀專利事務(wù)所(普通合伙) 43205
• 代理人: 舒欣

本發(fā)明涉及一種利用酶標儀微量比色法大批量快速檢測分析水中磷的方法，屬于水中磷檢測分析技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明利用酶標儀微量比色法，建立了一種大批量快速分析水中磷的方法，確定了方法的最佳參數(shù)和條件，并與分光光度法進行比較。酶標儀微量比色法與傳統(tǒng)鉬酸銨分光光度法相比，在精密度和準確度上無明顯差異。經(jīng)過實驗條件優(yōu)化，酶標儀微量比色法測定磷僅需樣品體積200?250μL，1 min內(nèi)可以完成96個樣品的測定，顯著增強了進行批量檢測分析的效率，同時大量減少了實驗廢水的排放，滿足快速、準確、省時、環(huán)保分析檢測工作的需要。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水中磷檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用酶標儀微量比色法大批量快速檢測分析水中磷的方法。

背景技術(shù)

磷是評價水質(zhì)的重要指標。水體中的含磷量過高，可引起水體富營養(yǎng)化，造成藻類的過度繁殖。因此，對水體中磷的測定是水質(zhì)監(jiān)測的一項重要內(nèi)容。目前，水體中磷的測定方法主要有鉬酸銨分光光度法、連續(xù)流動分析法和電感耦合等離子體發(fā)射光譜法等。其中，鉬酸銨分光光度法檢出限低、靈敏度高且運行成本低，一般實驗室使用較多。但在分析大批量的樣品時需投入大量的人力、物力，此時，鉬酸銨分光光度法則沒有儀器方法使用方便。

酶標儀是測定酶聯(lián)免疫反應(yīng)的一般儀器，其原理與分光光度法類似，能夠極大地節(jié)省時間和進行微量檢測，同時也能進行批量操作，且操作方法簡便，檢測成本低廉。關(guān)于酶標儀與分光光度計檢測效果的比較屢有研究報道。范鵬等分別用紫外分光光度計與酶標儀測定鹽酸川穹嗪的含量，結(jié)果兩種方法對鹽酸川穹嗪的測定結(jié)果沒有顯著差異。楊帆等分別采用分光光度法和酶標儀微量法測量發(fā)酵菌液濃度,結(jié)果表明,兩種方法測量的結(jié)果無顯著性差異(t＝0.02)，但酶標儀微量法比分光光度法測量的準確度和精密度高。

自從20世紀50年代酶標儀被設(shè)計出來后便迅速的進入到各行各業(yè)中去，主要是生物醫(yī)藥檢測方面。目前有關(guān)酶標儀在水質(zhì)檢測領(lǐng)域的應(yīng)用報道較少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種利用酶標儀微量比色法大批量快速檢測分析水中磷的方法，本發(fā)明以鉬酸銨分光光度法為基礎(chǔ)，優(yōu)化實驗條件，用酶標儀微量比色法測定了不同濃度的標準樣品和環(huán)境水樣，并對測定的準確度、精密度等進行了分析計算，探索酶標儀微量比色法在水中磷檢測的應(yīng)用，以較低的成本來彌補分光光度計在批量測定上的劣勢，以期為水中磷檢測提供更好的方法。

本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

利用酶標儀微量比色法大批量快速檢測分析水中磷的方法，步驟如下：

步驟一，標準液配制：取一系列不同體積的磷酸鹽標準使用液于微孔板中，分別加入不同體積的水；標準曲線分別移取不同體積的磷酸鹽標準使用液于微孔板中，加水至一定體積；

步驟二，水樣前處理；

步驟三，取一定量水樣于微孔板中，對應(yīng)加入一定量的抗壞血酸和鉬酸鹽溶液，室溫下振蕩顯色后，于700nm波長處測定光密度，減去空白值后，根據(jù)標準曲線換算成樣品濃度。

更進一步地，步驟一中所述一系列不同體積的磷酸鹽標準使用液分別為0μL，2μL，4μL，12μL，20μL，40μL，60μL。

更進一步地，步驟一中所述微孔板為96孔微孔板，步驟一中所述分別加入不同體積的水具體為：加水200μL，198μL，196μL，188μL，180μL，140μL。

更進一步地，所述水樣前處理參照GB11893-89中過硫酸鉀消解法：取一定量水樣于具塞刻度管中，加一定量過硫酸鉀，加塞固定，置于高壓蒸汽滅菌鍋，待壓力及相應(yīng)溫度達標后，保持一定時間后停止加熱，待壓力表讀數(shù)降至零后，取出放冷，后用水稀釋至標線。

更進一步地，步驟三中所述水樣為5個不同體積梯度的樣品：50μL、100μL、150μL、200μL、250μL。