[發(fā)明專利]一種針對沙門氏菌的核酸快速檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910165562.4
• 申請日: 2019-03-05
• 公開（公告）號: CN109652575A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許紹坤;信愛國;張薇;王耕;常志順;嚴紅亞
• 申請（專利權(quán)）人: 許紹坤
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 北京久維律師事務(wù)所 11582
• 代理人: 邢江峰

本發(fā)明涉及核酸檢測領(lǐng)域，具體是一種針對沙門氏菌的核酸快速檢測方法，步驟如下：1)引物稀釋；2)擴增反應(yīng)；3)將反應(yīng)液混勻后，放入定量PCR儀，設(shè)置65℃、30s一個循環(huán)，60個循環(huán)，循環(huán)完成后加溶解曲線分析；4)根據(jù)所獲得擴增曲線和溶解曲線判定，陰性對照組的檢測結(jié)果是陰性結(jié)果，則本次實驗有效，否則本次實驗無效。本發(fā)明具有高特異性、高靈敏度以及操作簡單的優(yōu)點；使用一個反應(yīng)管即可檢測出樣本是否感染了沙門氏菌，實現(xiàn)了實時監(jiān)控過程，并且可以針對擴增產(chǎn)物做溶解曲線分析，針對產(chǎn)物進行特異性的分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸檢測領(lǐng)域，具體是一種針對沙門氏菌的核酸快速檢測方法。

背景技術(shù)

沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學上具有重要意義的人畜共患病之一，其病原沙門氏菌，屬腸道細菌科，包括引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細菌。沙門氏菌病屬于畜禽常見病，發(fā)病率較高，危害大，能使人和各種畜禽致病。主要通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，人畜感染后可呈無癥狀帶菌狀態(tài)，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾，它可能加重病態(tài)或死亡率，畜禽感染沙門氏菌可引起相應(yīng)的傳染病，例如豬霍亂、雞白痢等，降低動物的繁殖生產(chǎn)力，甚至導(dǎo)致死亡。

沙門氏菌屬(Salmonella)是一大群形態(tài)、生化性狀及抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌。1885年沙門氏等在霍亂流行時分離到豬霍亂沙門氏菌，故定名為沙門氏菌屬。已發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)，菌體大小(0.6～0.9)×(1～3)微米，無芽胞，一般無莢膜，除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外，大多有周身鞭毛，需氧或兼性厭氧。沙門氏菌按生化反應(yīng)和DNA同源性分為2個種(腸道沙門菌、邦戈沙門菌)和4個亞屬。亞屬Ⅰ是生化反應(yīng)典型的和最常見的沙門氏菌；亞屬Ⅱ和Ⅳ是生化反應(yīng)不典型的沙門氏菌；亞屬Ⅲ是亞利桑那沙門氏菌。具有復(fù)雜的抗原結(jié)構(gòu)，一般可分為菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原3種。

根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部制定《人間傳染的病原微生物名錄》該菌危害程度為第三類，危害人民健康及養(yǎng)殖生產(chǎn)。利用新型病原學檢測技術(shù)，建立快速檢測方法用于沙門氏菌快速鑒定是有效、精準防控疫情的技術(shù)關(guān)鍵。因此，針對以上現(xiàn)狀，迫切需要開發(fā)一種針對沙門氏菌的核酸快速檢測方法，以克服當前實際應(yīng)用中的不足。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于核酸的快速、準確、靈敏的方法檢測人畜是否感染沙門氏菌的引物組，以及應(yīng)用上述引物組的核酸快速檢測方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種針對沙門氏菌的核酸快速檢測方法，檢測是否感染沙門氏菌的快速擴增引物組，引物組包括引物1和2、引物3和4、引物5和6；

引物1：ATGATCTGAGGCAAGTTGCGTTGTGAGCCATTCGTTAATGTC

引物2：GCAGAATTTGCGGATCGTTGGCACCTTCATCCATCGTTAC

引物3：CCTCAGCTCAATCATAACTCA

引物4：ATAACTGGTATTATGGCTGCC

引物5：CGTCATTGTTACCGTAATGCG

引物6：AGTTCAGTGCAAGCATGCA

沙門氏菌檢測實驗，包含以下實驗材料：

a)引物組：引物1和2、引物3和4、引物5和6干粉，各10D；

b)反應(yīng)濃縮液；

c)沙門氏菌菌液：沙門氏菌攻毒實驗的雞腎、肺、肝組織；

d)陽性對照為沙門氏菌DNA樣本，陰性對照為不含目的基因的反應(yīng)液；

運用本發(fā)明核酸檢測方法檢測沙門氏菌的步驟如下：