[發(fā)明專利]一種調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的基因Tcaim的siRNA及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910165440.5
• 申請(qǐng)日: 2019-03-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109722438B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王棋文;張春艷;劉光瑞;王澤;葉丙雨;李盼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A61K31/713;A61P1/16
• 代理公司: 新鄉(xiāng)市平原智匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41139
• 代理人: 路寬

本發(fā)明公開(kāi)了一種調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的新基因Tcaim的siRNA及其應(yīng)用，屬于基因工程及基因治療技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的技術(shù)方案要點(diǎn)為：一種調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的新基因Tcaim的siRNA，該siRNA的靶基因序列如序列表中SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本發(fā)明采用分子生物學(xué)手段，首次確證基因Tcaim與肝細(xì)胞增殖有顯著相關(guān)性，并通過(guò)篩查siRNA，篩選得到特異性的針對(duì)基因Tcaim的干擾靶點(diǎn)，應(yīng)用MTT、EdU、qRT?PCR、Western?blot技術(shù)分析該siRNA干擾靶點(diǎn)對(duì)大鼠肝細(xì)胞BRL?3A增殖的影響，結(jié)果表明應(yīng)用siRNA針對(duì)該靶點(diǎn)可以有效地抑制大鼠肝細(xì)胞BRL?3A增殖，能夠進(jìn)一步用于制備預(yù)防或治療肝病的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程及細(xì)胞工程領(lǐng)域，具體涉及一種調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的新基因Tcaim的siRNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝臟是動(dòng)物體內(nèi)重要的代謝器官和最大的消化腺，結(jié)構(gòu)復(fù)雜并且功能多樣，對(duì)生命的維持具有重要意義。肝臟具有非常強(qiáng)的再生能力，肝再生的機(jī)理十分復(fù)雜，由多種類型的肝臟細(xì)胞高度協(xié)調(diào)、涉及多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子、多種信號(hào)通路參與且受機(jī)體精密調(diào)控的動(dòng)態(tài)過(guò)程。研究肝再生和肝細(xì)胞增殖相關(guān)基因，對(duì)建立治療和預(yù)防肝病方法、開(kāi)發(fā)預(yù)防和治療肝病藥物具有重大理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。研究已表明，RNAi技術(shù)能特異性地向哺乳動(dòng)物細(xì)胞中導(dǎo)入siRNA，能降低靶基因的表達(dá)，進(jìn)而造成靶蛋白的表達(dá)下降，達(dá)到高效特異性的基因治療作用。

Tcaim基因全長(zhǎng)為31224bp，含11個(gè)外顯子，其外顯子分別位于該基因的1-198，3130-3199，9402-9558，14683-14935，19860-19982，22388-22485，22871-22962，26968-27200，28515-28646，29681-31224 bp處，其mRNA全長(zhǎng)為1789bp ，共編碼505個(gè)氨基酸，其保守結(jié)構(gòu)域是pfam14687（DUF4460）和pfam14688（DUF4461），是個(gè)未知功能的結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域家族存在于真核生物中，通常長(zhǎng)度為103-119個(gè)氨基酸。存在保守的HPD序列基序。有兩個(gè)完全保守的殘基（N和F）可能在功能上很重要。然而，在大鼠體內(nèi)，Tcaim還是一個(gè)功能不詳?shù)幕颍芊翊龠M(jìn)體外培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞增殖尚不明確。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的新基因Tcaim的siRNA及其應(yīng)用。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來(lái)解決上述技術(shù)問(wèn)題，一種調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的新基因Tcaim的siRNA，其特征在于該siRNA的靶基因序列如序列表中SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

本發(fā)明所述的調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的新基因Tcaim的siRNA，其特征在于該siRNA為以下雙鏈RNA分子中的任意一種：

正義鏈：5’-AAACCAACUCAGCUUACAUdTdT-3’，

反義鏈：3’-dTdTUUUGGUUGAGUCGAAUGUA-5’；

正義鏈：5’-UUGAACACGUCCAAAGCUUdTdT-3’，

反義鏈：3’-dTdTAACUUGUGCAGGUUUCGAA-5’；

正義鏈：5’-ACAUAGUCUUAGCCGCCUAdTdT-3’，

反義鏈：3’-dTdTUGUAUCAGAAUCGGCGGAU-5’。