[發(fā)明專利]一種放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910163399.8
• 申請(qǐng)日: 2019-03-05
• 公開（公告）號(hào): CN110656131A
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張新軍;曹艦艇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西藏農(nóng)牧學(xué)院
• 主分類號(hào): C12P1/04
• 分類號(hào): C12P1/04;C12R1/01
• 代理公司: 11569 北京高沃律師事務(wù)所
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明提供一種放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物的制備方法，涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，所述方法首先將產(chǎn)抗菌次生代謝產(chǎn)物的放線菌接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到菌體發(fā)酵液；所述液體培養(yǎng)基的原料包括酵母提取物、葡萄糖和麥芽提取物和水；所得菌體發(fā)酵液接種于固體培養(yǎng)基發(fā)酵，得到活性發(fā)酵產(chǎn)物；所述固體培養(yǎng)基的原料包括介質(zhì)支持物、酵母膏和蛋白胨和水；以乙酸乙酯浸提所述活性發(fā)酵產(chǎn)物，固液分離得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物。本發(fā)明提供的制備方法能夠明顯增加放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物的積累，提高代謝產(chǎn)量；相對(duì)于單純的液態(tài)發(fā)酵放線菌而言能耗低，發(fā)酵過(guò)程無(wú)需持續(xù)通入氧氣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物的制備方法。

背景技術(shù)

放線菌抗菌活性次生代謝物的發(fā)酵通常是用一定的液體培養(yǎng)基進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵，實(shí)驗(yàn)室里一般用三角瓶在搖床里進(jìn)行發(fā)酵，抗菌活性產(chǎn)物在發(fā)酵液中積累，通過(guò)一定的提純手段將活性產(chǎn)物提取出來(lái)。一般情況下，發(fā)酵液中所能積累的活性產(chǎn)物的量非常少，由于發(fā)酵液中活性成分的濃度非常低，由于后續(xù)的提純過(guò)程對(duì)活性成分損失比較大，有些含量低的活性成分無(wú)法被分離出來(lái)。因此，目前缺乏一種能夠快速大量提取放線菌所產(chǎn)抗菌活性次生代謝產(chǎn)物的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有放線菌抗菌活性次生代謝產(chǎn)物的方法產(chǎn)量低、分離難度大、能耗高的缺陷，提供了一種放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物的制備方法，所得抗菌次生代謝產(chǎn)物量可提高10倍以上，并且能耗低、產(chǎn)率高。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：

(1)將產(chǎn)抗菌次生代謝產(chǎn)物的放線菌接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)65～80h，得到菌體發(fā)酵液；

按重量份計(jì)，所述液體培養(yǎng)基的原料包括酵母提取物2～8份、葡萄糖2～8份和麥芽提取物8～20份和水800～1000份；

(2)以所述菌體發(fā)酵液接種于固體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，得到活性發(fā)酵產(chǎn)物；

按重量份計(jì)，所述固體培養(yǎng)基的原料包括介質(zhì)支持物70～150份、酵母膏1～6份和蛋白胨7～20份和水80～120份；

所述介質(zhì)支持物選自大米、高粱、小麥、米糠或稻殼中的一種或多種；

(3)以乙酸乙酯浸提所述活性發(fā)酵產(chǎn)物，固液分離得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放線菌抗菌次生代謝產(chǎn)物。

優(yōu)選的，所述步驟(1)中的培養(yǎng)時(shí)還伴隨攪拌。

優(yōu)選的，所述步驟(1)中的液體培養(yǎng)基pH為7.0～7.4。

優(yōu)選的，所述步驟(2)中菌體發(fā)酵液的接種量為0.12～0.5ml/kg。

優(yōu)選的，所述步驟(2)中的固體培養(yǎng)基制備方法包括以下步驟：

S1、將酵母膏、蛋白胨和水混合，調(diào)節(jié)pH值為7.5，得到預(yù)混合液；

S2、將預(yù)混合液與介質(zhì)支持物混合，靜置6～10h，得到混合物；

S3、將混合物滅菌，振蕩至介質(zhì)支持物的任意兩個(gè)顆粒之間不粘連，得到固體培養(yǎng)基。

優(yōu)選的，所述步驟(3)中，乙酸乙酯的浸提次數(shù)為2～4次。

優(yōu)選的，步驟(3)中，所述乙酸乙酯浸提時(shí)，乙酸乙酯與固態(tài)發(fā)酵物的體積比為1:1。

優(yōu)選的，步驟(3)中，所述浸提的時(shí)間優(yōu)選為30～60min。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：