[發明專利]基于納米酶的HPV16核酸檢測試紙條

在審

• 申請號: 201910160159.2
• 申請日: 2019-03-04
• 公開（公告）號: CN111647682A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 唐愛發;閻錫蘊;張建林;張德璽
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院;中國科學院生物物理研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6804;C12Q1/28
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 唐寧;梁婧文

本發明涉及一種基于納米酶的HPV16核酸檢測試紙條。試紙條同時利用了納米酶的磁性和過氧化物酶活性，具體如下：一次納米酶富集后起到了核酸濃縮的作用；層析結束后，利用納米酶的過氧化物酶活性，加入顯色液進行信號放大，起到了靈敏度提高的作用。

技術領域

本發明屬于醫藥生物技術領域，具體的，涉及一種基于納米酶的HPV16核酸檢測試紙條。

背景技術

磁性納米顆粒具有良好的生物相容性，其既具有納米材料所特有的性質，如粒徑小、比表面積大、偶聯容量高，又具有磁響應性及超順磁性，可以在恒定磁場下聚集和定位、在交變磁場下吸收電磁波產熱，利用這些特性，磁性納米顆粒被廣泛應用于磁共振對比劑、磁靶向藥物載體、細胞與生物分子分離、生物傳感與檢測以及磁感應腫瘤熱療等生物學領域。

納米酶核酸檢測試紙條的工作原理，是將能與待檢核酸下游互補配對的核酸分子通過Biotin和Streptavidin固定在硝酸纖維素膜(NC膜)這一固相載體上作為檢測線(T線)，將能與待檢核酸上游互補配對的核酸分子通過Digoxigenin和抗Digoxigenin抗體固定在納米酶上得到納米酶探針，將能與納米酶上的核酸互補配對的核酸分子通過Biotin和Streptavidin固定在NC膜上作為質控線(C線)。

當待測樣品(如尿液)與納米酶探針混合后，納米酶探針上的核酸分子與待測樣品中的目標核酸發生互補配對而形成納米酶目標核酸復合物，然后利用納米酶的磁性，將待測樣本中的目標核酸分子進行富集，加入到96孔板的小孔中，接下來將納米酶核酸檢測試紙條插入，液體在吸水墊的作用下層析，當納米酶目標核酸復合物層析到NC膜上的T線位置時，目標核酸的下游與T線上的核酸分子再一次互補配對而被捕獲，由于納米酶自身具有棕色因而能夠在T線的位置顯示條帶，條帶的深淺與待測液體中目標核酸的多少呈正相關。

此外，無論待測樣品中是否有目標核酸，當納米酶探針層析到NC膜上的C線位置時，此處固定的核酸都能與納米酶探針上的核酸通過互補配對將其捕獲，從而顯示條帶，以指示納米酶探針和NC膜上的核酸分子均正常有效，達到了質控的目的。

發明內容

本發明涉及一種基于納米酶的HPV16核酸檢測試紙條，所述的試紙條上裝有檢測線、質控線、探針墊和吸收待測樣品的樣品墊。

(1)質控線位置裝有如SEQ ID NO.2所示的核酸序列1’，

SEQ ID NO.2：5’-CAGTGATACAGGTGAAGATTTGGTAGATTT；

核酸序列1’的5’端標記Biotin，并與Streptavidin偶聯；

(2)檢測線位置裝有如SEQ ID NO.3所示的核酸序列3，

SEQ ID NO.3：5’-TGTGTTAAATAATCATTATCATTTACTATA；

核酸序列3的5’端標記Biotin，并與Streptavidin偶聯；

(3)如SEQ ID NO.1所示的核酸序列1與納米酶探針偶聯裝于探針墊上，

SEQ ID NO.1：5’-AAATCTACCAAATCTTCACCTGTATCACTG；

核酸序列1的3’端標記Digoxigenin，核酸序列1；

所述的Streptavidin(from Streptomyces avidinii)氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：

SEQ ID NO.4：