[發明專利]家蠶絲腺增量表達抗菌肽BmGlv2在提高蠶絲抗菌性能中的應用及方法

在審

• 申請號: 201910156293.5
• 申請日: 2019-03-01
• 公開（公告）號: CN109721650A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 郭鵬超;趙萍;夏慶友;王倩;王展
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/85;C12N15/12;A01K67/04
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

1.家蠶絲腺增量表達抗菌肽BmGlv2在提高蠶絲抗菌性能中的應用，其特征在于：所述抗菌肽BmGlv2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述抗菌為抗革蘭氏陰性細菌、抗革蘭氏陽性菌或抗真菌。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述革蘭氏陰性細菌為大腸桿菌JM109，所述革蘭氏陽性細菌為藤黃微球菌，所述真菌為球孢白僵菌或煙色曲霉菌。

4.一種提高蠶絲抗菌性能的方法，其特征在于，包括如下步驟：構建家蠶絲腺特異表達啟動子調控抗菌肽BmGlv2表達的轉基因重組表達載體，轉化然后獲得絲腺增量表達抗菌肽BmGlv2的轉基因家蠶品系，其獲得的蠶絲即為高抗菌性能的蠶絲，所述抗菌肽BmGlv2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述轉基因重組載體構建方法如下：以家蠶cDNA為模板，SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示序列為引物進行PCR擴增，克隆獲得抗菌肽BmGlv2基因，連入pMD-19T載體上，獲得pMD-19T-BmGlv2重組載體；然后以pSL1180[hr3Pser1spRedSer1PA]載體為模板，SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列為引物擴增獲得家蠶絲腺特異表達的Ser1啟動子，利用Spe I和Xho I將獲得的家蠶絲腺特異表達的Ser1啟動子插入至pMD-19T-BmGlv2載體上，獲得pMD-19T-Ser1-BmGlv2重組載體，接著用Asc I限制向內切酶酶切pMD-19T-Ser1-BmGlv2重組載體獲得目的片段-Ser1-BmGlv2，將目的片段-Ser1-BmGlv2重組到轉基因載體pyggBac[3xP3DsRed,af]，獲得轉基因重組載體，命名為pBac[3xp3DsRed,SV40-BmGlv2-Ser1]。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，獲得轉基因家蠶品系的方法如下：將所述轉基因重組載體與輔助質粒phsp70PIG按1:1的摩爾比例混合，利用轉基因微注射儀注射到2小時內生產的非滯育蠶卵中，然后將此G0代蠶卵孵育后飼養為成蟲并產下G1代的蠶卵，觀察胚胎時期的蠶卵，篩選眼睛中帶紅色熒光標記的家蠶為陽性個體。

7.根據權利要求4～6任一項所述的方法，其特征在于：所述抗菌為抗革蘭氏陰性細菌、抗革蘭氏陽性菌或抗真菌。

8.由權利要求4～7任一項所述方法制得的高抗菌性能蠶絲。