[發(fā)明專利]白色念珠菌適用性試驗菌株及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910149191.0
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN109735459B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧行安;呂涵陽;吳孝槐;瞿洪仁;單耕;趙紅陽;孫英健;王靜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/04;C12Q1/04;C12R1/725
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

1.白色念珠菌適用性試驗菌株，其特征是：僅包含一種目標(biāo)菌：白色念珠菌，目標(biāo)菌的目標(biāo)濃度為500～2000CFU/支，每支裝有0.2g的凍干粉；所述樣品屬藥品檢查中適用性試驗用菌株，應(yīng)用于藥品微生物檢測過程中適用性試驗；所述適用性試驗菌株以海藻糖、明膠和無菌水為基質(zhì)，其中海藻糖體積分數(shù)為10%、明膠體積分數(shù)為1%。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白色念珠菌適用性試驗菌株的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的配制、凍干保護劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗、樣品定值五個步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復(fù)蘇傳代—增菌—菌液分裝—菌懸液配制—凍干和包裝—儲存，具體過程為：

（1）菌株復(fù)蘇傳代

將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種到營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在30~35℃下使其復(fù)蘇和生長，并對復(fù)蘇的菌株進行鑒定；

（2）增菌

目標(biāo)菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期末，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護劑中制成菌液；

（3）菌液分裝

將上一過程得到的菌液與凍干保護劑混合，配制100mL菌液，將此菌液置于磁力攪拌器上不斷攪拌下平均分裝到菌液儲存瓶中，每瓶5mL，共20瓶，置于液氮中保存?zhèn)溆茫?/p>

（4）菌懸液配制

按目標(biāo)菌的目標(biāo)濃度500～2000 CFU/支，取適量上述5mL菌液與1500mL凍干保護劑混合，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到西林瓶中，0.3mL/瓶，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實；

（5）凍干和包裝

將裝有菌懸液的樣品瓶開蓋放入凍干機中，冷凍干燥40～50h，當(dāng)樣品冷凍干燥結(jié)束后，直接進行箱內(nèi)加塞，關(guān)閉機器，樣品瓶中樣品為真空狀態(tài)；冷凍干燥機參數(shù)按如下設(shè)置：

冷凍速度 (Cooling Rate) 0.5℃/min

早期冷凍點 (Incipient Freezing Point) -1℃ 15min

冷凍溫度 (Cooling temperature) -40℃

共熔點 (Melting Point Eutectic temperature) -29℃

加熱溫度 (Heating temperature) 20℃ 120min；

（6）儲存

將樣品放置在-18℃條件下避光保存，從全部樣品中隨機挑選樣品發(fā)放給實驗室或進行均勻性和穩(wěn)定性試驗。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白色念珠菌適用性試驗菌株的制備方法，其特征是：所述凍干保護劑為含有海藻糖和明膠的無菌水，其中體積分數(shù)分別為：海藻糖10%，明膠1%；一次性配制相同濃度的菌液，可重復(fù)制備多批次相同量值范圍的適用性試驗菌株。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白色念珠菌適用性試驗菌株的制備方法，其特征是：所述樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗按照均勻性和穩(wěn)定性試驗參照GB/T 15000.3-2008《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則（3）標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法》進行。