[發(fā)明專利]黑曲霉適用性試驗菌株及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910149171.3
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN109797108A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙紅陽;李天順;閆平平;楊潔;謝艷;王偉
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江寶錄檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/685
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

本發(fā)明屬于藥品微生物學檢測方面的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種黑曲霉適用性試驗菌株及其制備方法。黑曲霉適用性試驗菌株僅包含一定量的黑曲霉。本發(fā)明均勻性、穩(wěn)定性符合適用性試驗菌株要求，菌株所含菌數(shù)在適用性試驗標準要求范圍內(nèi)，最大程度滿足藥品微生物檢測過程中適用性試驗、促生長試驗等需要，樣品的制備方法，工藝簡單，成功率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物學檢測方面的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種黑曲霉適用性試驗菌株及其制備方法。

背景技術(shù)

介于藥品的特殊性，藥品微生物學檢驗領(lǐng)域的非常特殊，要求每次檢測之前培養(yǎng)基等供試品均需進行適用性檢查，對試驗用菌株有規(guī)定的濃度范圍要求。目前已有的純菌株大多數(shù)未進行定量，僅可供定性使用，僅有少數(shù)的定量菌株。對于該類定量菌株，均勻性和穩(wěn)定性尤為重要，現(xiàn)有的定量菌株存在穩(wěn)定性差，運輸條件要求較高等問題。

黑曲霉是曲霉屬真菌中的一個常見種，廣泛分布于土壤、空氣和谷物上，可引起食物、谷物和果蔬的霉腐變質(zhì)，有的可產(chǎn)生致癌性的黃曲霉毒素。如果制備的黑曲霉樣品中，黑曲霉易發(fā)生變化(繁殖和死亡等)，就會導(dǎo)致樣品的保存期短，樣品的均勻性和穩(wěn)定性差。因此，綜合考慮細菌的生化特性，選取性質(zhì)相對穩(wěn)定的黑曲霉對保證樣品的均勻性和穩(wěn)定性十分重要。黑曲霉樣品制備的工藝技術(shù)要求比較高，并且樣品的均勻性和穩(wěn)定性與凍干的菌種、凍干的工藝條件、凍干保護劑的使用、再水化的介質(zhì)等均有密切的關(guān)系。

藥品中黑曲霉指標，直接影響藥品的衛(wèi)生質(zhì)量與安全。因此，制備均勻性與穩(wěn)定性俱佳的黑曲霉適用性試驗菌株，可以避免致病風險。如果藥品中存在黑曲霉，極易對患者造成感染等，直接威脅患者的生命。黑曲霉檢驗的隨意性和不確定性，真實地反映檢測實驗室的能力，這對提高實驗室質(zhì)量控制水平，保障藥品安全，甚至打破國際貿(mào)易壁壘、提高我國藥品國際競爭力都具有特殊重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種滿足藥品微生物檢測過程中適用性試驗要求的定量黑曲霉適用性試驗菌株；同時，克服黑曲霉適用性試驗菌株中總的活的細菌數(shù)目在運輸、儲存和測試等過程中菌落數(shù)都可發(fā)生變化的問題，本發(fā)明的另一個目的是提供該適用性試驗菌株的制備方法，工藝簡單，成功率高。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是：黑曲霉適用性試驗菌株，其特征是：僅包含一種目標菌：黑曲霉，目標菌的目標濃度為500～2000CFU/支，每支裝有0.2g的凍干粉。

所述樣品屬藥品檢查中適用性試驗用菌株，應(yīng)用于藥品微生物檢測過程中適用性試驗。

所述適用性試驗菌株以海藻糖、明膠和無菌水為基質(zhì)，其中海藻糖體積分數(shù)為10％、明膠體積分數(shù)為1％。

黑曲霉適用性試驗菌株的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的配制、凍干保護劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗、樣品定值五個步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復(fù)蘇傳代—增菌—菌液分裝—菌懸液配制—凍干和包裝—儲存，具體過程為：

(1)菌株復(fù)蘇傳代

將標準菌株接種到營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在20～25℃下使其復(fù)蘇和生長，并對復(fù)蘇的菌株進行鑒定；

(2)增菌

目標菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期末，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護劑中制成菌液；

(3)菌液分裝

將上一過程得到的菌液與凍干保護劑混合，配制100mL菌液，將此菌液置于磁力攪拌器上不斷攪拌下平均分裝到菌液儲存瓶中，每瓶5mL，共20瓶，置于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

(4)菌懸液配制

按目標菌的目標濃度500～2000CFU/支，取適量上述5mL菌液與1500mL凍干保護劑混合，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到樣品瓶(西林瓶)中，0.3mL/瓶，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實；