[發明專利]一種體外重建的人紅細胞代用品及其制備方法

有效

• 申請號: 201910143092.1
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109675021B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 王翔;趙押金;候鰻;陳東;任揚;黨琦;李春龔
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: A61K38/42
• 分類號: A61K38/42;A61K47/46;A61K49/00;A61P7/08;A61P39/00;A61P35/00
• 代理公司: 重慶市恒信知識產權代理有限公司 50102
• 代理人: 李金蓉

1.一種體外重建的人紅細胞代用品，其特征在于，由以下方法制備：

（1）制備血影細胞載體

用等滲磷酸鹽緩沖液洗滌全血，將血液分離，去除血漿、白細胞、血小板等，得到紅細胞；然后將紅細胞置于破膜液中進行處理；之后進行高速冷凍離心，收集上清液，即得溶血液，離心洗滌至上清無色透明，沉淀即為血影細胞載體；

（2）制備加載液

將步驟（1）中的溶血液用10kD的超濾離心管分離，離心條件為3900rpm，4℃，離心30mins，以得到濃縮血紅蛋白液；同時，用25%氯化鈉溶液調節溶血液，使得溶血液的氯化鈉終濃度分別為0%、0.05%、0.1%、0.2%或0.4%；最后根據需要將經氯化鈉溶液調節后的溶血液和濃縮血紅蛋白液混勻，配制成血紅蛋白液，即為加載液；所述血紅蛋白液的滲透壓為56~70mOSM/L，血紅蛋白濃度為35~91g/L；

（3）體外重建人紅細胞

將步驟（1）所述血影細胞載體緩慢恢復等滲，將其置于加載液中，混勻，進行孵育，之后進行冷凍離心，棄上清液，再用等滲磷酸鹽緩沖液洗滌沉淀至上清透明，沉淀即為重建人紅細胞。

2.根據權利要求1所述一種體外重建的人紅細胞代用品，其特征在于：步驟（3）所述孵育溫度為0℃，孵育時間為1~60min，之后于室溫放置1~60min，再在37℃孵育1~60min；所述冷凍離心的條件為，1~30min，4℃，200~5000rpm。

3.根據權利要求2所述一種體外重建的人紅細胞代用品，其特征在于：步驟（3）所述血影細胞載體與加載液的體積比為1:1~20。

4.一種體外重建的人紅細胞代用品的制備方法，包括以下步驟：

（1）制備血影細胞載體

用等滲磷酸鹽緩沖液洗滌全血，將血液分離，去除血漿、白細胞、血小板等，得到紅細胞；然后將紅細胞置于破膜液中進行處理；之后進行高速冷凍離心，收集上清液，即得溶血液，離心洗滌至上清無色透明，沉淀即為血影細胞載體；

（2）制備加載液

將步驟（1）中的溶血液用10kD的超濾離心管分離，離心條件為3900rpm，4℃，離心30mins，以得到濃縮血紅蛋白液；同時，用25%氯化鈉溶液調節溶血液，使得溶血液的氯化鈉終濃度分別為0%、0.05%、0.1%、0.2%或0.4%；最后根據需要將經氯化鈉溶液調節后的溶血液和濃縮血紅蛋白液混勻，配制成血紅蛋白液，即為加載液；所述血紅蛋白液的滲透壓為56~70mOSM/L，血紅蛋白濃度為35~91g/L；

（3）體外重建人紅細胞

將步驟（1）所述血影細胞載體緩慢恢復等滲，將其置于加載液中，混勻，進行孵育，之后進行冷凍離心，棄上清液，再用等滲磷酸鹽緩沖液洗滌沉淀至上清透明，沉淀即為重建人紅細胞。

5.根據權利要求4所述一種體外重建的人紅細胞代用品的制備方法，其特征在于：步驟（3）所述孵育溫度為0℃，孵育時間為1~60min，之后于室溫放置1~60min，再在37℃孵育1~60min；所述冷凍離心的條件為，1~30min，4℃，200~5000rpm。

6.根據權利要求5所述一種體外重建的人紅細胞代用品的制備方法，其特征在于：步驟（3）所述血影細胞載體與加載液的體積比為1:1~20。

7.權利要求1所述體外重建的人紅細胞代用品在制備不同攜/釋氧能力的血液代用品中的應用。

8.權利要求1所述體外重建的人紅細胞代用品在制備抗癌藥物或醫學影像示蹤劑中的應用。