[發(fā)明專利]一種單細胞中金納米棒的絕對定量檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910141723.6
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109765164B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設計）人: 何瀟;羅文赫
• 申請（專利權）人: 中國科學院高能物理研究所
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10
• 代理公司: 北京君尚知識產(chǎn)權代理有限公司 11200
• 代理人: 司立彬

本發(fā)明提供了一種單細胞中金納米棒的絕對定量檢測方法，首先采用光刻膠技術制作標準樣品板，得到一系列含有AuNRs的樣品點坑陣列，然后對樣品點坑中的AuNRs進行計數(shù)統(tǒng)計，同時測定對應樣品點坑中Au的含量，根據(jù)Au含量與AuNRs數(shù)量之間的對應關系建立AuNRs絕對定量檢測標準，最后使含AuNRs暴露處理過的細胞呈單細胞分布，測定每個細胞中Au的含量，根據(jù)AuNRs絕對定量檢測標準曲線，統(tǒng)計出每個細胞中吞的AuNRs數(shù)量。利用該方法可以比較不同肝臟細胞對金納米棒攝取的能力，創(chuàng)建不同濃度、不同修飾的金納米棒在小鼠肝臟細胞中分布的模型，可在細胞層面開展對動物活體代謝行為的研究。同時，該方法還可以應用于其他容易在SEM下進行計數(shù)統(tǒng)計的納米顆粒的絕對定量檢測。

技術領域

本發(fā)明屬于納米材料檢測技術領域，涉及一種單細胞中金納米棒的絕對定量檢測方法。

背景技術

納米技術的發(fā)展促使一批具有獨特光、電、磁等性質(zhì)納米材料的誕生，由于納米材料具有優(yōu)越的性能，其在生物醫(yī)學診斷、治療和藥物傳遞等方面有著巨大的應用前景。貴金屬納米材料，尤其是各種形狀的納米金顆粒(AuNPs)在近年成為研究熱點，由于其尺寸形貌易于控制合成、化學穩(wěn)定性高、易于進行表面修飾以及其獨特的光電性質(zhì)，使得它在生物成像、生物傳感、癌癥診斷、療法應用以及藥物傳輸?shù)确矫嬗兄鴱V泛的應用前景。例如，中國專利申請CN201410370072.5公開了一種基于金納米棒多功能探針的核素-切倫科夫發(fā)光-CT多模成像方法，將⁶⁸Ga-AuNRs-RGD多功能分子探針應用于多模態(tài)分子成像領域。此外，研究人員亦可借助其他成像分子探針，如核素探針⁶⁴Cu和¹¹¹In，光學探針I(yè)CG，磁共振探針Fe₃O₄等標記金納米材料構建多功能納米探針，實現(xiàn)活體成像及治療研究。

金納米顆粒在生物醫(yī)學領域應用前景廣闊，但其在體內(nèi)的代謝行為還未充分了解。目前，利用放射性同位素作為示蹤劑，標記在納米材料上，掌握材料在生物體內(nèi)的代謝過程比較常見(即同位素示蹤法)。由于放射性同位素能不斷地發(fā)射具有一定特征的射線(如γ射線)，因此通過放射性探測方法，可以隨時追蹤含有放射性核素的納米材料在體內(nèi)或體外的位置及其數(shù)量的運動變化情況。例如，中國專利申請CN 2017100449279公開了一種摻⁵⁹Fe納米金棒及其制備方法，在納米金棒的合成過程中摻入⁵⁹Fe，對納米金棒進行放射性標記及對目標物進行檢測。但是，很多針對納米材料在動物體內(nèi)代謝的研究方法主要集中在組織層面，如熒光標記法，無法檢測細胞的實際攝取量；而TEM等非定量檢測手段由于儀器和人為原因可能會引起偏差，說服力不足。

目前在單細胞檢測層面上，已有的相關實驗只停留在對單個細胞中元素含量的定量檢測，是一種相對定量的檢測手段，并沒有實現(xiàn)對單個細胞中單個納米顆粒的絕對定量檢測。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明提供了一種單細胞中金納米棒的絕對定量檢測方法，利用該方法比較不同肝臟細胞對金納米棒攝取的能力，創(chuàng)建不同濃度、不同修飾的金納米棒在小鼠肝臟細胞中分布的模型，可在細胞層面開展對動物活體代謝行為的研究。

一種單細胞中金納米棒的絕對定量檢測方法，包括以下步驟：

(1)采用光刻膠技術制作標準樣品板，得到一系列含有AuNRs的樣品點坑陣列；

(2)對樣品點坑中的AuNRs進行計數(shù)統(tǒng)計，同時測定對應樣品點坑中Au的含量，根據(jù)Au含量與AuNRs數(shù)量之間的對應關系建立AuNRs絕對定量檢測標準；

(3)使含AuNRs暴露處理過的細胞呈單細胞分布，測定每個細胞中Au的含量，根據(jù)上述AuNRs絕對定量檢測標準曲線，統(tǒng)計出每個細胞中吞的AuNRs數(shù)量。

進一步地，步驟(1)中樣品板基底需要有著納米級平整度的表面、良好的導電性以及光通性，優(yōu)選具有納米級平整度的OLED-ITO導電玻璃。