[發明專利]p28-Fc融合蛋白及其編碼核酸分子、重組表達載體、重組細胞和應用

在審

• 申請號: 201910141315.0
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109651514A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 王仁喜
• 申請（專利權）人: 王仁喜
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10;A61K38/20;A61P37/02;A61P25/00;A61P17/06;A61P27/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供p28?Fc融合蛋白及其編碼核酸分子、重組表達載體、重組細胞和應用，涉及藥物技術領域，所述p28?Fc融合蛋白，由hIL?27p28和Fc組成。人IL?27p28的信號肽編碼區有不利于哺乳動物表達的堿基序列，為了獲得正確構型的IL?27p28，本發明所述hIL?27p28含有Hongeybee melittin secretion信號肽，以替代人IL?27p28信號肽，從而克服異源表達時無法獲得構型正確的可溶性IL?27p28的問題。本發明還提供了所述p28?Fc融合蛋白及其編碼核酸分子、重組表達載體或重組細胞在制備治療自身免疫性疾病的藥物中的應用。

技術領域

本發明涉及藥物技術領域，尤其涉及p28-Fc融合蛋白及其編碼核酸分子、重組表達載體、重組細胞和應用。

背景技術

白介素-27(IL-27)是IL-12家族(IL-12、IL-23、IL-27和IL-35)中的一員。IL-12家族細胞因子都由一條α鏈(p19、p28或p35)和一條β鏈(p40或EBI3)組成，例如IL-27是由p28和EBI3(EB病毒誘導基因3)組成的[Pflanz,S.et al.(2002)Immunity 16:779.]。IL-27p28也被稱為IL27，p28，IL30，IL-27，IL27p28等。

p28是一個與IL-12的p35相似的多肽，而EBI3則是一個與IL-12/IL-23的p40相似的蛋白。IL-27與TCCR/WSX-1和gp130形成的異源二聚體受體復合物結合，gp130是IL-6家族的細胞因子共有的一個受體亞基[Pflanz,S.et al.(2004)J.Immunol.172:2225]。

IL-27是主要的抑制性細胞因子，但可能有些促炎效應。IL-27常時在局部抗原呈遞細胞激發的自身免疫反應的消退期生成。此外，廣泛的刺激(包括nTreg細胞，IFN-β，Toll樣受體的配體和他汀類藥物)通過抗原呈遞細胞誘導IL-27的生產，從而限制炎癥的發展。

雖然IL-27單獨作用沒有明顯的直接促炎效應，但是在IL-12和/或IL-2的聯合作用下，它可以通過T細胞和自然殺傷細胞誘導IFN-β產生。IL-2限制nTreg和T細胞的分化，而IL-27可以抑制IL-2的產生，但是IL-2又可以通過抑制IL-27R(WSX-1)的表達而拮抗這種效應。IL-27能抑制Th17細胞的發育和誘導IL-10分泌性Tr1細胞樣調節亞群的發育，部分作用是通過誘導c-Maf而發揮作用[Batten,M.et al.(2006)Nat.Immunol.7:929.Stumhofer,J.S.et al.(2006)Nat.Immunol.7:937]。

Crabe等介紹了p28亞基和細胞因子樣因子1(CLF)組成另一種分泌復合物[Crabe,S.et al.(2009)J.Immunol.183:7692]。與IL-27相似，p28/CLF也由激活的樹突狀細胞分泌，但它需要TCCR/WSX-1、gp130和IL-6Rα來傳遞信號。與IL-27不同，p28/CLF不僅能抑制小鼠幼稚CD4⁺T細胞的增殖，也能在TGF-β存在時誘導IL-17的表達。在接著用PMA/離子毒素重新刺激后，IL-17的表達水平與TGF-β和IL-6的誘導相當，這表明p28/CLF在促進小鼠Th17分化上可替代IL-6。以上的研究認為IL-27p28是與Ebi3或CLF等形成異源二聚體而共分泌。