[發明專利]一種從造血干細胞分化產生NK細胞的方法及其培養基在審
| 申請號： | 201910140579.4 | 申請日： | 2019-02-26 |
| 公開（公告）號： | CN109777773A | 公開（公告）日： | 2019-05-21 |
| 發明（設計）人： | 顧雨春;尹樂 | 申請（專利權）人： | 北京呈諾醫學科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 100176 北京市大興區北京經濟*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 造血干細胞分化 分化培養基 基礎培養基 造血干細胞 半量換液 分化 基因修飾 重要意義 高純度 接種 成功 | ||
1.一種從造血干細胞分化產生NK細胞的方法，包括如下步驟：
(a)將造血干細胞接種于NK分化培養基I中，培養6-8天；
所述NK分化培養基I為在NK分化基礎培養基中加入細胞因子SCF、IL3、IL7、IL15和Flt3-L后得到的培養基；
(b)完成步驟(a)后，采用NK分化培養基II進行半量換液，繼續培養；培養期間每隔5-7天使用所述NK分化培養基II進行半量換液，直至獲得NK細胞；
所述NK分化培養基II為在所述NK分化基礎培養基中加入細胞因子SCF、IL15、IL7和Flt3-L后得到的培養基。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述NK分化基礎培養基包括DMEM高糖培養基、“Ham's F-12Nutrient Mix，GlutaMAXTMSupplement培養基”、熱滅活人AB血清、L-谷氨酸、2-巰基乙醇、亞硒酸鈉、氨基乙醇和L-抗壞血酸。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：
在所述NK分化培養基I中，所述SCF的濃度為15-25ng/mL；所述IL3的濃度為3-7ng/mL；所述IL7的濃度為15-25ng/mL；所述IL15的濃度為8-12ng/mL；所述Flt3-L的濃度為8-12ng/mL；和/或
在所述NK分化培養基II中，所述SCF的濃度為15-25ng/mL；所述IL15的濃度為8-12ng/mL；所述IL7的濃度為15-25ng/mL；所述Flt3-L的濃度為8-12ng/mL。
4.根據權利要求1至3任一所述的方法，其特征在于：
步驟(a)中，所述培養的條件為35-39℃、3-7％CO2培養；和/或
步驟(b)中，所述培養的條件為35-39℃、3-7％CO2培養。
5.根據權利要求1至4任一所述的方法，其特征在于：步驟(b)中，所述“直至培養獲得NK細胞”為自步驟(a)接種到所述NK分化培養基I中開始計算的第21-28天。
6.培養基，其特征在于：所述培養基為權利要求1至5中任一所述NK分化培養基I或所述NK分化培養基II。
7.成套培養基，其特征在于：所述成套培養基包括權利要求1至5中任一所述NK分化培養基I和所述的NK分化培養基II。
8.如權利要求7所述成套培養基，其特征在于：所述成套培養基由權利要求1至5中任一所述NK分化培養基I和所述的NK分化培養基II組成。
9.權利要求6所述的培養基、或、權利要求7或8所述成套培養基在從造血干細胞分化產生NK細胞中的應用。
10.如權利要求1至5任一所述的方法或權利要求9所述的應用，其特征在于：所述造血干細胞為x1)或x2)：
x1)iPS細胞分化獲得的造血干細胞；
x2)從離體的人源血液分離獲得的造血干細胞。
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