[發(fā)明專利]一種提高種公豬精子活力激動(dòng)劑的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910140331.8
• 申請(qǐng)日: 2019-02-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109797131A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董煥聲;崔金強(qiáng);潘慶杰;黃嬌嬌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/076
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及一種提高種公豬精子活力激動(dòng)劑的制備方法，包括以下步驟：(1)取出小公豬睪丸組織浸潤(rùn)；(2)用PBS緩沖液清洗；(3)加入細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，離心去上清；(4)加入透明質(zhì)酸酶和膠原酶IV震蕩，加入細(xì)胞培養(yǎng)液離心去上清；(5)加入胰蛋白酶和脫氧核糖核酸酶震蕩，加入細(xì)胞培養(yǎng)液(6)細(xì)胞篩過(guò)濾；(7)離心去上清液，加細(xì)胞培養(yǎng)液；(8)細(xì)胞培養(yǎng)傳代；(9)將細(xì)胞液培養(yǎng)、保存，即得。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用效果好、成本低、容易加工生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高種公豬精子活力激動(dòng)劑的制備方法。

背景技術(shù)

種公豬精子品質(zhì)在公豬管理工作中有至關(guān)重要的作用，精子質(zhì)量直接關(guān)系到豬場(chǎng)的配種受胎率和產(chǎn)仔數(shù)，進(jìn)而影響整個(gè)豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益。種公豬采精后檢查精液，有助于了解種公豬精子狀態(tài)，掌握種公豬的繁殖性能。精子的常規(guī)檢查包括精液的量、氣味、色澤、活力和密度，其中精子活力作為表征公豬精子質(zhì)量好壞的一個(gè)重要指標(biāo)，應(yīng)用十分廣泛。精子活力是指精液中運(yùn)動(dòng)精子所占的百分率。由于只有具有運(yùn)動(dòng)的精子才可能具有正常的生存能力和受精能力，所以精子活力與雌性受胎率密切相關(guān)，從而它是目前評(píng)定精液品質(zhì)優(yōu)劣的常規(guī)檢查的主要指標(biāo)之一。如能有效的提高精子活力，勢(shì)必會(huì)提高種豬的繁殖率，進(jìn)而提高豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。因此，制備能夠顯著提高種公豬精子活力的激動(dòng)劑，具有重要意義。

目前，提高種公豬精子活力的方法主要為(1)肌肉注射睪丸酮，具體注射方法為一天一次，連續(xù)注射三天。(2)人工喂服雅士勇。具體飼喂方法為與脫霉劑，多維素，維生素A、B、D，生育酚，胡蘿卜素等混合，攪拌于豬飼料中，連續(xù)喂服一周。(3)加強(qiáng)公豬運(yùn)動(dòng)，每天喂生雞蛋，胡蘿卜等方法。

在利用以上方法提高公豬精子活力的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)：(1)所述的肌肉注射睪丸酮屬于雄性激素類藥物，注射睪丸酮雖然可使公豬性欲亢進(jìn)，但長(zhǎng)期使用可致公豬睪丸萎縮，精子生成受抑制，還可能會(huì)出現(xiàn)紅細(xì)胞增多，嘔吐，皮疹，神經(jīng)血管性水腫，肝功能異常等副作用，對(duì)于公豬產(chǎn)精年限也有一定影響。(2)中雅士勇主要成分為左旋肉堿、天門(mén)冬氨酸、VB₁、麥氨酸、VB₆、甘氨酸等，雅士勇雖然能有有效提高提高種畜禽受精率，降低死淘率，但有研究發(fā)現(xiàn)：“雅士勇”口服液對(duì)大白豬和長(zhǎng)白豬射精量無(wú)明顯影響，且“雅士勇”為意大利進(jìn)口種公豬保健品，價(jià)格相對(duì)較高。(3)中所述加強(qiáng)公豬運(yùn)動(dòng)，每天喂生雞蛋，胡蘿卜等方法，實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)對(duì)于提高種公豬精子活力有限，且用時(shí)較長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)提高種公豬精子活力的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種成本低廉、使用方便、效果顯著、毒害作用小的提高種公豬精子活力激動(dòng)劑的制備方法，本發(fā)明制備的種公豬精子激動(dòng)劑，體外使用、應(yīng)用效果好、成本低、容易加工生產(chǎn)，具有較好的市場(chǎng)前景。

本發(fā)明具體通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種提高種公豬精子活力激動(dòng)劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)取出小公豬睪丸組織，放入加有1％雙抗的37℃生理鹽水中浸潤(rùn)10～30min；

(2)取出浸潤(rùn)后的公豬睪丸組織，用含有1％雙抗的PBS緩沖液清洗三遍；

(3)加入DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃下培養(yǎng)30min，充分分解睪丸組織，將分散后的組織液轉(zhuǎn)移至離心管中，離心去上清液；

(4)在離心管中加入1.5mL透明質(zhì)酸酶和1.5mL膠原酶IV，在37℃下，每隔2分鐘劇烈震蕩一次，連續(xù)震蕩2～3次后，加入3mL的DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)液，離心去上清液；

(5)在離心管中加入1.5mL胰蛋白酶和1.5mL脫氧核糖核酸酶，在37℃下，每隔2分鐘劇烈震蕩一次，連續(xù)震蕩2～3次后，加入3mL的DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)液；

(6)將細(xì)胞液依次用80、200、300目的細(xì)胞篩過(guò)濾；