[發(fā)明專利]一種好氧反硝化細菌及其脫氮方法

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• 申請日: 2019-02-25
• 公開（公告）號: CN110042070A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發(fā)明（設計）人: 司圓圓;梁端峰;陳興漢;關則智;林佳佳
• 申請（專利權）人: 陽江職業(yè)技術學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C02F3/02;C02F101/16;C12R1/01
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 張清彥

1.一種好氧反硝化細菌，其特征在于，其DM液體培養(yǎng)基原材料包括：檸檬酸鈉5.0g、KNO₃2.0g、K₂HPO₄ 1.0g、KH₂PO₄ 1.0g、M_gSO₄ 0.2g、微量鹽溶液2ml、蒸餾水1000ml、固體培養(yǎng)基加2％瓊脂、1％溴百里酚藍(BTB)1ml和pH 7.0～7.2。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種好氧反硝化細菌，其特征在于：所述DM液體培養(yǎng)基原材料包括：檸檬酸鈉5.0g、KNO₃ 2.0g、K₂HPO₄1.0g、KH₂PO₄ 1.0g、M_gSO₄ 0.2g、微量鹽溶液2ml、蒸餾水1000ml、固體培養(yǎng)基加2％瓊脂、1％溴百里酚藍(BTB)1ml和pH 7.0。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種好氧反硝化細菌，其特征在于：所述DM液體培養(yǎng)基原材料包括：檸檬酸鈉5.0g、KNO₃ 2.0g、K₂HPO₄1.0g、KH₂PO₄ 1.0g、M_gSO₄ 0.2g、微量鹽溶液2ml、蒸餾水1000ml、固體培養(yǎng)基加2％瓊脂、1％溴百里酚藍(BTB)1ml和pH 7.2。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種好氧反硝化細菌的脫氮方法，其特征在于：具體包括一下步驟：

步驟一、脫氮活性檢測：將好氧反硝菌接種于DM液體培養(yǎng)基中，30℃搖床振蕩培養(yǎng)5d，根據(jù)試驗要求，通過調整轉速和不同氣體組分(O2，Ar)，調節(jié)溶解氧濃度，取樣(以未接種菌液的培養(yǎng)基的值作為初始值)離心后取上清液測培養(yǎng)基中NO-32N降解率以及NO-22N的積累量，為了保證試驗的準確性，上述試驗重復3次；

步驟二、好氧反硝菌生長及反硝化曲線確定：取實驗好氧反硝菌純培養(yǎng)24h后的菌液按5％的接種量接種到未加BTB的DM液體養(yǎng)基中，30℃、120r/min搖床振蕩培養(yǎng)96h，每隔3h取樣1次，用紫外分光光度儀在波長600nm處測培養(yǎng)液的生長量，然后取離心后的上清液測培養(yǎng)液中亞硝酸鹽的積累量，每次實驗重復3次；

步驟三、最佳碳源、氮源與碳氮比的確定：為確定好氧反硝化菌T7生長的最佳碳源、氮源與碳氮比，分別進行了相關的試驗設計，碳源試驗:以硝酸鉀(0.2％)為唯一氮源，分別以酵母膏、酒石酸鉀鈉、葡萄糖、檸檬酸鈉、乙酸鈉、碳酸氫鈉為碳源；氮源試驗:以檸檬酸鈉(015％)為唯一碳源，分別以草酸銨、亞硝酸鈉、磷酸二氫銨、硫酸銨、氯化銨、硝酸鉀為氮源，碳氮比試驗:以檸檬酸鈉為碳源(015％)，硝酸鉀(0.2％)為氮源，并將碳氮比分別設為1、5、10、15、20、25等6個不同的值；

步驟四、好氧反硝菌對硝酸鹽氮與亞硝酸鹽氮廢水的處理：將好氧反硝菌擴大培養(yǎng)后按5％的接種量投放，取已經(jīng)培養(yǎng)好的培養(yǎng)液于4000r/min的轉速下離心25min，得到好氧反硝化細菌菌泥，稱量并記錄，稱與菌泥等質量的PVA溶于10倍量的80℃蒸餾水中并攪拌，水浴加熱溶解，冷卻至30℃，將菌泥加入冷卻的PVA固定劑中，攪拌均勻后，再將其做成固定化的小球，浸入飽和硼酸溶液中，防止粘連，在11.5℃恒溫靜置24h，將固定有好氧反硝化細菌T7的小球置于10L滅菌的好氧反硝化培養(yǎng)液中進行適應性培養(yǎng)，直至恢復其脫氮特性，再將其應用于不同濃度的硝酸鹽氮與亞硝酸鹽氮模擬廢水的處理，并以菌泥直接投放時的處理效果做參照。

5.根據(jù)權利要求4所述的一種好氧反硝化細菌的脫氮方法，其特征在于：所述步驟三中接種量均為5％，置于30℃，120r/min恒溫空氣搖床上振蕩培養(yǎng)24h后取樣，采用紫外分光光度儀在600nm下測細菌的生長量，以確定菌株的生長狀況。

6.根據(jù)權利要求4所述的一種好氧反硝化細菌的脫氮方法，其特征在于：所述步驟四中試驗條件:溫度30℃,DO(5.0±0.5)mg·L-1,pH值7.0～7.2,C/N比為5。