[發明專利]一株產低溫葡萄糖氧化酶的擔子菌

在審

• 申請號: 201910137580.1
• 申請日: 2019-02-25
• 公開（公告）號: CN109628331A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 張慶芳;王一茜;遲乃玉;劉春瑩
• 申請（專利權）人: 大連大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/04;C12R1/645
• 代理公司: 大連八方知識產權代理有限公司 21226
• 代理人: 朱秀芬

本發明涉及一種微生物篩選及發酵領域，具體涉及一株產低溫葡萄糖氧化酶的野生酵母菌株擔子菌(Basidioascus sp.)WYQ 23菌株，該菌株于2019年1月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，郵編：100101，保藏中心登記入冊編號：CGMCC No.17180。本發明提供的擔子菌WYQ 23菌株遺傳穩定性良好，能穩定的保持其產低溫葡萄糖氧化酶的優良性狀，制備出的葡萄糖氧化酶純化容易，在低溫下具有良好的酶活活性，在食品、飼料、醫療等行業有廣泛的應用前景，經濟和社會效益顯著。

技術領域

本發明涉及一種微生物篩選及發酵領域，具體涉及一種野生酵母菌株擔子菌。

背景技術

葡萄糖氧化酶是需氧脫氫酶，利用氧作為電子受體，專一性地將葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫，在此過程中葡萄糖氧化酶起到了去除葡萄糖、脫氧、殺菌等作用。由于其天然無毒副作用及其獨特的脫氧效果而產生的保鮮作用被廣泛地用于食品加工領域。

目前葡萄糖氧化酶的工業化生產菌株主要為陸地來源的霉菌，其培養溫度較高，表達量較低，雜蛋白較多，造成分離純化困難，生產成本高且無法直接應用于食品領域。海洋來源的低溫葡萄糖氧化酶研究相對較少，野生非轉基因酵母生產菌株更是鮮有報道。目前我國生產的葡萄糖氧化酶工業酶制劑純度普遍較低，長期以來依賴進口，因此尋找葡萄糖氧化酶進口酶制劑的替代產品具有重要現實意義。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種從海洋資源中分離低溫葡萄糖氧化酶的菌株及其應用。

一株產低溫葡萄糖氧化酶的野生酵母菌株擔子菌(Basidioascus sp.)WYQ 23菌株，該菌株于2019年1月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，郵編：100101，保藏中心登記入冊編號：CGMCC No.17180。

將得到的該菌序列在NCBI上進行比對，查找同源性最高的已知序列菌株，經對比，該菌株與Basidioascus sp.相似度最高，達99％。該菌株ITS區序列已申請GenBank號，為SUB4615397 Seq1 MK038973。

WYQ 23菌株從大連渤海海域的海泥(經度121.662527，緯度38.861911)取樣用顯色篩選固體培養基進行篩選。

顯色篩選固體培養基：葡萄糖60-80g/L，蛋白胨3-4g/L，KH₂PO₄ 2-3g/L，MgSO₄0.5-0.7g/L，KCl 0.5-0.7g/L，NaNO₃ 3-4g/L，CaCO₃ 3-4g/L，可溶性淀粉8-10g/L，脫氧膽酸鈉0.2-0.3g/L，海水配制，pH自然，121℃滅菌20min。

WYQ 23菌株具有下述特性：

1.菌落形態學特征

將產低溫葡萄糖氧化酶的野生酵母菌株擔子菌(Basidioascus sp.)WYQ 23菌株置于YPD固體培養基上于25℃培養生長，3-7天后得到直徑約為4-10mm的褐色菌落，菌落呈圓形，扁平，較不透明，表面較光滑，正面與反面以及邊緣與中央部位的顏色較一致。

2.菌株形態學特征

本發明的WYQ 23菌株顯微鏡下呈卵圓形，與酵母菌鏡下形態一致。

3.生理與生化特性

本發明的WYQ 23菌株培養溫度為20-25℃，最適生長溫度為25℃，且在pH5.6的條件下生長良好。

4.該WYQ 23菌株ITS區具有如SEQ ID：1所示的核苷酸序列。