[發明專利]檢測GNB3基因rs5443位點多態性的人工模擬核酸分子信標與試劑盒

在審

• 申請號: 201910122797.5
• 申請日: 2019-02-20
• 公開（公告）號: CN111593103A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 葛猛;潘世讓;杜柏均;余倩;王宏偉
• 申請（專利權）人: 葛猛
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種GNB3基因rs5443位點多態性的分型檢測方法與試劑盒。本發明采用GNB3基因特異性的引物SEQ1和SEQ2擴增GNB3基因片段，同時在GNB3基因特異性的引物界定的擴增區域內設計GNB3基因特異性人工模擬核酸分子信標SEQ3?FAM和SEQ4?VIC。本發明提供的基于基因特異性PCR結合人工模擬核酸分子信標判斷GNB3基因rs5443位點多態性的方法不僅準確率高，而且還具有檢測速度快、操作簡單、結果判讀客觀、閉管反應污染少等優點，非常適合于在臨床中大規模開展。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及GNB3基因rs5443位點多態性的分型檢測方法與試劑盒。

背景技術

重度抑郁癥（MD），簡稱抑郁癥，是一種精神疾病，其特征表現為在至少兩周時間內的大多數情況下情緒低沉。它經常伴隨著自尊心較低，對正常生活失去興趣，沒有活力，不明原因的痛苦等現象。患者可能偶爾也會有異于常人的虛假念想。有些人在抑郁期內表現不明顯，而有些人則有一定的癥狀。重度抑郁癥可能會對個人的生活、工作、教育以及睡眠、飲食習慣和身體健康產生負面影響。2%~8%的重度抑郁癥患者死于自殺，約50%自殺的人患有抑郁癥或其它情緒障礙。

重度抑郁癥發病率在全球人口中占3%，受影響的人群從日本的7%到法國的21%不等。與發展中國家相比，該病在發達國家的存在率更高。最常見的發病年齡為20~30歲，且女性受影響的程度是男性的兩倍。

目前人們普遍認為抑郁癥的產生是遺傳、環境和心理因素綜合作用的結果。患病的風險因素包括患病家族史，主要的生活發生變化，濫用藥物及慢性健康問題。約40%的患病風險與遺傳因素有關，遺傳—環境相互作用對疾病的發展起著重要作用。

鳥嘌呤核苷酸結合蛋白（G蛋白）是通過cAMP途徑的細胞反應的關鍵調節劑。G蛋白異常的表達和功能與多種精神疾病的病理生理學密切相關，包括重癥抑郁癥。G蛋白含有多個亞基，每個亞基由幾個異構型編碼。位于染色體12p13.31上的GNB3基因編碼G蛋白β3亞基，其功能多態性位點rs5443（C/T）與增加信號轉導及離子轉運活性，重度抑郁癥的風險和抗抑郁治療反應有關。CC基因型的個體僅在暴露于高度的負面事件時對MD敏感，而CT型和TT型個體在暴露于低度負面事件時對MD敏感。因此，對rs5443位點進行分型檢測可對MD的預防及治療提供指導。

目前，基因多態性檢測的方法主要有PCR-Sanger測序法、芯片雜交法、高分辨率溶解曲線法等。這些方法雖然都可以在一定程度上檢測基因多態性，但都有不可忽視的局限性。Sanger測序法步驟較多，需要PCR后處理，不僅操作繁瑣，還易產生污染，并不能滿足臨床的需求。芯片雜交法操作繁瑣，其檢測還依賴于昂貴的設備儀器，導致成本較高。高分辨率溶解曲線法對儀器要求高，需要具有安裝高分辨率軟件、溫度比較敏感的機器才能使用，臨床推廣存在困難。基于Taqman水解探針的熒光定量PCR，利用Taq酶的外切酶活性，切斷探針產生熒光信號，由于Taqman探針熒光基團與淬滅基團并不緊密靠近，導致熒光淬滅不徹底，存在背景熒光信號。此外，Taqman探針對于單堿基錯配識別能力較差，極易生成非特異熒光信號，干擾結果判讀，進而影響檢測的準確性。因此，臨床上迫切需要一種簡便易行、靈敏度高、準確可靠的檢測基因多態性的方法。