[發明專利]一種注射用黃芪多糖分子量的檢測方法

在審

• 申請號: 201910122772.5
• 申請日: 2019-02-19
• 公開（公告）號: CN109682903A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 徐小平
• 申請（專利權）人: 天津賽諾制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88;G01N30/74
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 孟旭;王為

本發明涉及一種注射用黃芪多糖分子量分布的檢測方法，所述方法采用分子排阻色譜法和高效液相色譜法聯用的方法，其中分子排阻色譜法的色譜條件為：Shodex Asahipak GS?2G 7B(保護柱)與GS?620HQ色譜柱串聯，以0.5?1％無水硫酸鈉水溶液為流動相，流速為每分鐘0.5?1ml，柱溫為35?45℃，采用示差折光檢測器檢測。

技術領域：

本發明涉及一種藥物檢測方法，特別涉及一種中藥制劑注射用黃芪多糖分子量的檢測方法。

背景技術：

注射用黃芪多糖是一種益氣補虛。用于倦怠乏力，少氣懶言，自汗，氣短，食欲不振屬氣虛證因化療后白細胞減少，生活質量降低，免疫功能低下的腫瘤患者的藥物。其中藥成分為黃芪多糖，黃芪多糖是從中藥黃芪中提取、分離，純化所得有效部位。

臨床前實驗表明：黃芪多糖具有刺激骨髓造血和增強免疫功能的作用。

免疫方面：

1、體外實驗表明：黃芪多糖能夠刺激小鼠脾臟細胞的增殖和人外周血單核細胞分泌多種細胞因子。

2、體內實驗表明：黃芪多糖可增強正常小鼠，受免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能：促進血清溶血素形成：提高空斑形成細胞的溶血能力及碳粒廓清作用：增強DNFB誘發的小鼠遲發型變態反應；增強小鼠Nl細胞的活性和IL-2 的產生。

造血方面：

體外實驗表明。黃芪多糖可促進小鼠骨髓基質細胞的增殖；促進小5-骨髓中性粒細胞和骨髓巨核細胞的增殖和成熟：對受5-氟尿嘧啶或絲裂霉素C化療或X 光輻射的小鼠。黃芪多糖可促進其骨髓造血祖細胞或脾臟前體細胞的增殖與成熟，并促進其外周血白細胞、紅細胞和血小板的回升。

黃芪多糖分子量分布很廣，即使采用相同的黃芪原料，提取或分離過程中的差異都可能造成產物的不同，目前已分離純化出十幾種黃芪多糖。而不同分子量的多糖對療效會有影響，為了保證注射用黃芪多糖的治療，對其分子量分布的檢測成為重要的質量控制指標，但目前注射用黃芪多糖的質量標準中無分子量分布的檢測項目，因此研究一種能用于注射用黃芪多糖分子量分布的檢驗方法尤其中藥。

現有黃芪多糖分子量分布的檢測，見于以下公開出版物中

《太原工業大學學報》1994年04期，應用150－C ALC/GPC色譜儀測試黃芪多糖的分子量及其分布，楊金蘭，武正簧，【摘要】：本文應用美國Wat ers公司產大型精密儀器150－CALC/GPC(簡稱150－C)色譜儀測定了黃芪多糖的分子量及其分布。通過解析譜圖為從黃芪中分離、集取不同分子量級分的黃芪多糖工藝的研究提供了大量、可靠的分析數據。同時，提供了一種測定天然大分子有機物特征常數的方法。

《食品科學》2004年08期黃芪多糖的分子量分布，閆巧娟，韓魯佳，江正強，皇才進，【摘要】：本文通過分級醇沉、分步醇沉和超濾方法研究黃芪多糖的分子量分布。結果表明:分級醇沉濃度對應的得率隨醇濃度的升高而呈增加趨勢；糖的含量變化起伏較大,醇濃度為60％時所得多糖含量比較低,醇濃度為30％和 70％時所得多糖含量較高；分步醇沉的醇濃度為10％時沉淀下來的多糖所占比例最大,醇濃度達到80％時大部分多糖都可以沉淀下來；而所得多糖含量除90％醇濃度時較低外,其余相差不大；超濾后黃芪多糖大部分分布在離心沉淀和截留分子量 150千道爾頓(150kDa)以上部分,兩者占了57.6％；其含量除3kDa以下和6kDa至 50kDa部分較低外,其它部分含量相差不大。黃芪多糖的分布很不均勻,大分子量和小分子量的多糖較多,而3kDa至150kDa這一段的多糖只占總多糖的13.2％。

《寧夏醫學院學報》2006年第2期韓鳳蘭，胡建英，高效液相色譜法測定寧夏黃芪多糖的分子量及其分布，摘要：在進行注射用黃芪多糖標準提升時，通過研究確認建立了注射用黃芪多糖分子量分布的檢測方法，可以精確定位黃芪多糖在制備工藝中經分離純化得到的具有特定重均分子量范圍和分布的多糖有效部位，從而更為精準的限定和控制此產品的質量，擴大藥品的適應癥。